[发明专利]结构域抗体构建体

说明书

本申请是申请日为2007年2月1日、申请号为200780008370.8、发明名称为“结构域抗体构建体”的发明专利申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及可用于人类治疗的结构域抗体构建体。更具体而言，本发明涉及与人TNF-α结合的结构域抗体构建体以及其在治疗特征在于TNF-α活性的病症中的用途。

发明背景

肿瘤坏死因子α（TNF-α）是参与介导休克和多种人类疾病和病症的病理生理学的一种细胞因子，所述人类疾病和病症包括脓毒症、感染、自身免疫性疾病例如类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎和其它肠病况、银屑病、中毒性休克、移植排斥以及移植物抗宿主病。TNF-α主要由激活的巨噬细胞和T淋巴细胞产生，但在急性炎症反应过程中也由嗜中性粒细胞、内皮细胞、角质形成细胞和成纤维细胞产生。

由于其在炎症中的作用，在减轻炎性病症的症状的努力中，TNF-α已作为重要的用于抑制的靶标而显露出来。已追求了多种为了疾病的临床治疗而抑制TNF-α的方法，特别是包括可溶性TNF-α受体和特异于TNF-α的抗体的用途。

结构域抗体

结构域抗体（dAb）是抗体的最小功能性结合单元，并且相应于抗体的重链可变区（V_H）或轻链可变区（V_L）。结构域抗体具有约13kDa的分子量，或小于完整抗体大小的十分之一。

与常规抗体不同，结构域抗体在细菌、酵母和哺乳动物系统中良好表达。它们的小尺寸允许更高的摩尔量/克产物，从而提供了效力/毫克剂量的显著增加。此外，dAb可以用作构建部件，以制备治疗产物例如多重靶向性的包含dAb的分子，其中两个或更多个dAb结合至两个或更多个不同的分子靶，或者可以将dAb合并入为肺或口服施用而设计的结构中。

本发明者现在已设计出一种新的包含免疫球蛋白可变结构域的结构域抗体构建体，所述可变结构域连接至包括有截短的C_H1结构域的恒定区。推测包含恒定区有助于延长通常具有短的持续时间的dAb的体内半衰期。

新世界灵长类免疫球蛋白

进化上遥远的灵长类，例如新世界灵长类，足够类似于人以具有类似于人抗体的抗体，从而使得当衍生自此类灵长类的抗体被引入人中时，宿主不产生抗抗体免疫应答。新世界灵长类（广鼻猴下目（Platyrrhini））包含至少53个种，其通常分成2个科：狨科（Callithricidae）和悬猴科（Cebidae）。狨科由狨和组成。悬猴科包括松鼠猴、青猴、蜘蛛猴、绒毛猴、悬猴、夜或枭猴和吼猴。

先前的研究已表征了表达的普通狨（Callithrix jacchus）的免疫球蛋白重链储库（von Budingen H-C等人,Characterization of the expressed immunoglobulin IGHV repertoire in the New World marmoset Callithrix jacchus.Immunogenetics;53:557-563(2001)）。鉴定了6个IGHV亚群，其显示了与它们的人IGHV对应物的高度序列相似性。当与互补决定区（CDR）相比较时，构架区是更保守的，其中最高程度的可变性位于CDR3中。普通狨与人IGHV序列之间的相似性程度小于旧世界灵长类与人之间的相似性程度。

发明概述

第一方面，本发明提供了与人TNF-α结合的结构域抗体构建体，所述构建体包含：

(a)与人TNF-α结合的结构域抗体（dAb）;

(b)经修饰的铰链区序列；

(c)人或灵长类重链恒定区序列，其具有不多于20个残基，更优选地不多于10个残基，更加优选地不多于5个残基和更为优选地单个残基的截短的C_H1结构域，

其中所述经修饰的铰链区序列包含缺失或者半胱氨酸残基的单氨基酸置换，所述半胱氨酸残基通常促进重和轻抗体链间二硫键的形成。

第二方面，本发明提供了编码本发明第一方面的结构域抗体构建体的核酸序列。