[发明专利]基于纳米金催化的共振散射光谱四环素检测方法

权利要求书

1.一种四环素光敏性的实现方法，其特征在于，通过将四环素适配体和纳米金混合后加入四环素溶液，然后通过加入氯化钠溶液进行聚集反应，最后与含有硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠的溶液混合，使得混合后得到的产物在620nm波长处的共振散射信号的变化量与四环素浓度呈反比例关系。

2.根据权利要求1所述的方法，去特征是，加入四环素溶液后混合液中四环素的浓度范围为：0.0095–2.5μmol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，去特征是，所述的四环素适配体溶液通过以下方式制备得到：将定制合成好的含有1.29nmol四环素适配体的离心管在10000转每分钟的离心机下离心2分钟，然后向离心管中加入258μL超纯水溶解混合均匀，制成5μmol/L的四环素适配体，置于4°C冰箱保存备用。

4.根据权利要求1所述的方法，去特征是，所述的纳米金溶液是指：向100mL沸腾的0.01wt%的氯金酸中加入3.5mL1.0%的柠檬酸酸三钠溶液，加热煮沸搅拌30分钟，溶液颜色由灰色变为亮红色，停止加热并继续搅拌至冷却，然后用0.2μm超滤膜过滤，所得溶液即为纳米粒径为15nm的纳米金，并置于4°C冰箱保存备用。

5.根据权利要求1所述的方法，去特征是，所述的氯化钠溶液为500mmol/L，检测时体系添加7μL。

6.根据权利要求1所述的方法，去特征是，所述的硫酸铜为0.028mol/L，检测时体系添加10μL；氢氧化钠为6.25mol/L检测时体系添加100μL；酒石酸钾钠为1.23mol/L，检测时体系添加200μL；葡萄糖为10mg/mL，检测时体系添加50μL。

7.一种基于纳米金催化的共振散射光谱四环素检测方法，其特征在于，通过构建含有已知四环素浓度的检测体系后，荧光光度计进行共振散射光谱信号扫描得到共振散射信号变化量标准曲线，然后将待测对象与超纯水，即对照样分别加入含有四环素适配体和纳米金的混合液，并通过加入氯化钠溶液进行聚集反应，最后与含有硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠的溶液混合，最后经荧光光度计进行共振散射光谱信号扫描得到共振散射信号变化量标准曲线得到待测对象中的四环素浓度。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征是，所述的检测体系通过以下步骤制备得到：

1)制备已知浓度的四环素检测体系：取11支包含四环素核酸适配体与纳米金混合液的离心管，在25℃条件下孵育15分钟；然后分别加入5μL不同浓度四环素标准液，使得整个检测体系中的四环素含量维持在0.01–2.5μmol/L，充分混匀后再将离心管置于25°C条件下孵育15min；在上述混合液中加入7μL500mmol/L NaCl溶液充分混合均匀并定容至500μL，留作以下测定用；

2)取一支离心管将四环素标准溶液用5μL超纯水替代，其他按步骤1处理后作为空白对照体系溶液；

3)制备菲林试剂-葡萄糖还原体系：取11支试管，在每支试管中加入10μL 0.028mol/LCuSO₄，100μL 6.25mol/L  NaOH，200μL 1.23mol/L KNaC₄H₄O₆混合均匀，取50μL 10mg/mL葡萄糖加入以上试管中混合均匀；分别将步骤1和步骤2中的标准溶液体系和空白体系转移到以上11支试管中，混合均匀后定容到1000μL，置于60℃恒温孵育器里孵育6分钟，取出后用自来水冷却至室温待用。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征是，所述的共振散射信号变化量标准曲线是指：用荧光光度计对检测体系以620nm条件下同步扫描获得其共振散射信号光谱，将不同浓度的四环素混合液和空白对照液的共振散射光谱信号差值作为纵坐标，四环素混合液的浓度作为横坐标得到标准曲线。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征是，所述的同步扫描进采用石英荧光用比色皿盛放检测体系，用荧光光度计以激发光狭缝为5nm，发射光狭缝为2.5nm，激发光和发射光波长均为620nm条件下同步扫描。