[发明专利]一种同时高效制备金针菇多糖和蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌有效成份提取分离技术领域，具体而言，涉及一种同时高效制备金针菇多糖和蛋白的方法。

背景技术

金针菇(Flammulina velutipes)又名朴菇，冬菇，隶属真菌门，担子菌纲，伞菌目，口蘑科，金针菌属。金针菇营养极为丰富，有增智菇和“一休菇”等美称，是世界上著名的食用菌，目前已发展成为第三大食用菌。金针菇清嫩爽口，鲜美味香，营养丰富，是一道极为高档的佳肴，具有较高的营养价值。文献报道，金针菇中含较高的蛋白质、碳水化合物和粗纤维，而脂肪含量较低，是一种不可多得的高营养食品。

目前，在金针菇所含的生物活性成份中，国内外对金针菇多糖的研究报到比较多，开发利用也比较深入，而对其他活性成分的研究开发比较少。对金针菇多糖的制备主要是水提，醇沉，然后利用Sevage 法，三氯醋酸沉淀蛋白或蛋白酶水解的方法来去除蛋白，在制备金针菇多糖这种单一成份时，金针菇蛋白都白白的丢弃，不仅导致提取成本的提高，而且浪费了大量的金针菇资源。

双水相萃取技术始于20世纪60年代，由于双水相萃取条件温和，容易放大，可连续操作，因此该技术已成功地应用于蛋白质、核酸和病毒等生物产品的分离和纯化，也有抗生素，中药有效成份等小分子分离方面的尝试(食品工业科技，2012，33: 191-194；食品科学，2009，30:110-113；沈阳药科大学学报，2012，4: 302-305；中药材，2009，11: 1754-1757)。离子液体是一类室温或相近温度下完全由离子组成的有机液体化合物，离子液体一般由有机阳离子和无机或有机阴离子组成。离子液体与目前广泛应用的有机熔剂相比，具有以下独特优点：蒸汽压低，不易挥发；具有较强的化学稳定性；具有较大的结构可调性；具有介质和催化双重功能；具有较好的导电性、热稳定性和抗氧化性等。离子液体可与多种物质如盐、糖、表面活性剂等形成双水相体系，其在萃取分离生物物质方面表现出优异的性能，这无疑会开拓一种新的绿色分离技术。现有技术对双水相体系用于活性成分提取分离的报道比较多，但是利用离子液体/盐双水相的报道比较少。公开号为CN101164905A的专利文献利用离子液体-盐双水相体系萃取回收水溶液中的芳香类化合物；公开号为CN102267933A的专利文献利用离子液体-双水相体系萃取氨基酸；公开号为CN102796163A的专利文献利用离子液体提取分离豆粕中的蛋白质；以上技术都取得了较好的提取分离效果。然而，利用离子液体/盐双水相来同时制备金针菇多糖和蛋白的技术却没有文献报道。

发明内容

针对现有技术提取金针菇多糖时的提取率低及不能同时制备蛋白成份导致浪费的缺陷，本发明目的在于提供一种能从金针菇中同时高效、绿色、低成本地制备多糖和蛋白的方法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种同时高效制备金针菇多糖和蛋白的方法，该方法包括以下步骤：

（1）原料预处理：干燥金针菇子实体经粉碎后，与蒸馏水按1：30-50的重量比混合成混合液后，备用；

（2）酶解处理：取占混合液重量0.05-0.2％的纤维素酶加入混合液中，调解pH值至4-6，振荡或搅拌下于45-55℃酶解30-90分钟；

（3）微波辅助萃取：将步骤（2）所得酶解液进行微波处理5-20分钟后，离心，得上清液和沉淀物；

（4）醇沉多糖：将步骤（3）所得上清液减压浓缩，加入2-4倍体积的无水乙醇进行醇沉后，离心，冷冻高燥后得金针菇粗多糖；

（5）双水相萃取：将金针菇粗多糖溶于水，得粗多糖溶液，加入离子液体/盐双水相体系中，在温度30-50℃、pH 4-7的条件下震荡30-50分钟，震荡速度为100-200r·min^-1，然后静置20-40分钟分层；

（6）金针菇多糖的制备：取出富含无机盐的下层，用截留量为6000的超滤膜除盐，浓缩，冷冻干燥得金针菇多糖；

（7）金针菇蛋白的制备：取出富含离子液体的上层，加入二氯甲烷进行萃取，取有机相真空旋转干燥去除二氯甲烷，得金针菇蛋白。

优选地，上述方法的步骤（2）中微波处理的条件为50-100H_Z，300-800W。

优选地，上述方法的步骤（3）、（4）的离心步骤均在6000rpm离心10分钟。

优选地，上述方法的步骤（5）所述的离子液体/盐双水相体系，其中离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐离子液体，盐为NaH₂PO₄和NaCl。