[发明专利]快速鉴别重组乙型肝炎疫苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速鉴别重组乙型肝炎疫苗产品质量的方法，所述方法可以快速而有效地检测重组乙型肝炎疫苗类产品的品质，特别是可以快速判断此类产品的真伪。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，可缩写HBV)是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科(hepadnavividae)。HBV能够引起肝脏炎性病变。甚至肝硬化和肝癌。全球约有3.8亿HBV慢性感染者，我国是乙肝病毒感染的高发区，约有1.2亿人是乙型肝炎表面抗原(HBV Surface antigen,HBsAg)携带者。因此，接种乙型肝炎疫苗是阻断HBV传播最有效的方法。

在本发明中，提及的术语“重组乙型肝炎疫苗(酵母)”表示的含义是其属于生物制品的一种，是重组酵母(例如酿酒酵母或汉逊酵母)表达的HBsAg经纯化，加入铝佐剂而成，可以直接肌肉注射到病人体内，可刺激机体产生抗乙型肝炎病毒的保护性抗体，用于预防乙型肝炎。

市售的重组乙型肝炎疫苗为乳白色混悬液体，规格一般按照含HBsAg的量分为10μg/ml和20μg/ml两种。接种对象主要是乙型肝炎易感者，包括新生儿、从事医疗工作的医护人员以及其他高危人群。

有资料显示，中国乙型肝炎疫苗每年的需求量约3600万份，并以每年15%的速度大幅度增长，远远高于全球10%的平均增长水平。疫苗检验的速度要能跟上市场增长的需求，而疫苗成品检测周期比较长。目前，重组乙型肝炎疫苗的检验主要依据《中国药典》2010年版三部，其中的鉴别试验可以快速鉴别疫苗的真伪。该鉴别试验采用酶联免疫法(ELISA)检查，应证明含有HBsAg。由于重组酵母表达的HBsAg与铝佐剂通过物理作用力吸附在一起很难解离下来，用ELISA的方法直接检测存在困难。根据以往的实验需要用处理液解离，再稀释到合适的浓度后进行检测。此外，卫生部要求自2010年10月1日起执行《中华人民共和国药典(2010年版)》后，HBsAg ELISA试剂盒由原来的一步法变为两步法，检验时间也由原来的2个小时左右增加到3个多小时。ELISA检测时间的延长，再加上样品前处理的时间，一个鉴别试验要用4-5个小时才能完成，操作过程繁琐且消耗时间长，不能体现鉴别试验快速检验的特点。因此，迫切需要一种检测速度快、专属性强的高效检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速鉴别重组乙型肝炎疫苗(酵母)产品质量的方法，本发明人发现采用如本发明所述方法可以快速而有效地检测重组乙型肝炎疫苗(酵母)类产品的品质，特别是可以快速判断此类产品的真伪。此外，本发明人还发现，该方法不但适用于重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)和重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)等重组酵母表达获得的乙型肝炎疫苗，而且还适用于甲型乙型肝炎联合疫苗这种包含重组乙型肝炎疫苗(酵母)的混配物。

具体而言，本发明第一方面提供了一种快速鉴别重组乙型肝炎疫苗产品质量的方法，该方法包括以下步骤：

(i)取待检测的重组乙型肝炎疫苗产品，用处理液对该产品进行解离，得到经解离处理的重组乙型肝炎疫苗测试液；

(ii)将步骤(i)所得测试液加载到胶体金试纸条的加样端(本领域技术人员通常将该加样端制成加样垫的形式，因此该加样端亦可称为加样垫)，或者将胶体金试纸条的加样端浸入到步骤(i)所得测试液中；

(iii)测试液在毛细作用下沿膜向胶体金试纸条的另一端(本领域技术人员通常将该另一端制成吸水垫的形式，因此该另一端亦可称为吸水垫)移动，观察胶体金试纸条检测区的质控线和检测线显色情况；

(iv)根据胶体金试纸条检测区的质控线和检测线显色情况，判断所测重组乙型肝炎疫苗产品的质量。

根据本发明第一方面的方法，其中所述的重组乙型肝炎疫苗选自：重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)、重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)、甲型乙型肝炎联合疫苗。上述三种疫苗均已收载于2010年版中国药典三部中；然而，尽该药典还收载了另一种乙型肝炎疫苗即重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)，然而令人遗憾的是，本发明人发现本发明方法针对这种乙型肝炎疫苗却并不适用，例如本发明方法针对该重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的最低灵敏度在50μg/ml以上，而本发明方法针对上述三种疫苗的最低灵敏度在2μg/ml以下。

根据本发明第一方面的方法，其中所述的处理液是包含TritonX-100、二乙醇胺和PBS的水溶液。