[发明专利]一种乙基香兰素抗原和抗体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种乙基香兰素半抗原，其特征在于具有如式（Ⅰ）所示的结构：

其中，R为碳链长度为C₁～C₆的亚烷基，X是羧基、巯基或氨基。

2.权利要求1所述的乙基香兰素半抗原的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将乙基香兰素和4-溴丁酸乙酯或5-溴戊酸乙酯溶解于强极性有机溶剂中，加入碳酸钾和四丁基碘化铵，15～25℃反应12～16h；反应结束后加入冰水溶解反应液，用乙酸乙酯萃取，水洗涤后收集有机相，干燥得到粗品；

（2）将步骤（1）所得粗品溶于无水乙醇中，加入氢氧化锂15～25℃反应2～4h，加水稀释，乙醚萃取，取下层，再加入酸调pH至4～6.0，有固体析出，经氯仿洗涤、抽滤、蒸干得到乙基香兰素半抗原。

3.根据权利要求2所述的乙基香兰素半抗原的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的强极性有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或乙腈；

步骤（1）中所述的乙基香兰素、4-溴丁酸乙酯或5-溴戊酸乙酯、碳酸钾的摩尔比为1:1～2:3～5；

步骤（1）中所述的四丁基碘化铵的投料量为乙基香兰素质量的10～20%；

步骤（1）中所述的干燥为通过30～40℃旋转蒸干20分钟干燥；

步骤（2）中所述的氢氧化锂的用量为乙基香兰素质量的20～40%。

4.一种乙基香兰素完全抗原，其特征在于具有如式（Ⅱ）所示的结构：

其中，R为碳链长度为C₁～C₆的亚烷基；P为载体物质，载体物质为蛋白质、利用具有足够数目氨基酸的合成聚氨基酸或其它具有反应官能团的合成或天然多聚体物质。

5.权利要求4所述的乙基香兰素完全抗原的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

将权利要求1所述的乙基香兰素半抗原溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，加入DEC盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，15～25℃反应12～16小时，加入到由PBS溶解的载体物质溶液中，15～25℃下反应4～8小时，反应液用PBS在4～20℃下透析2～3天，离心收集上清液，冷冻干燥得乙基香兰素完全抗原；

所述的乙基香兰素半抗原、DEC盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺与载体物质的摩尔比为1:1～2:1～2:0.05；

所述的载体物质为牛血清蛋白、鸡蛋白蛋白或钥孔戚血蓝蛋白；

所述的PBS为10mM、pH7.2～7.4的PBS；

所述的离心为4℃、8000r/min离心10分钟。

6.一种乙基香兰素抗体，其特征在于：所述的乙基香兰素抗体利用权利要求4所述的乙基香兰素完全抗原制备杂交瘤细胞，通过特异性筛选、体外培养、纯化而获得。

7.权利要求6所述的乙基香兰素抗体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：体外通过次黄嘌呤H、氨基蝶呤A和胸腺嘧啶核苷T选择性培养基筛选乙基香兰素杂交瘤细胞；通过ELISA方法检测杂交瘤细胞上清液中抗体效价，选择高效价高特异性的孔扩大培养；将抗体阳性细胞进行有限稀释克隆筛选；选出只有一个克隆生长的孔，扩大培养，同样方法筛选三次以上，得到稳定分泌抗体的阳性细胞株，即得到乙基香兰素抗体。

8.一种乙基香兰素检测用胶体金免疫层析分析试纸，其特征在于包括垫衬和垫衬上依次搭接的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述的金标垫包被有胶体金标记的乙基香兰素抗体；所述的硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，检测线区包被有乙基香兰素完全抗原，质控线区包被有羊抗鼠IgG多抗。