[发明专利]针对VEGFR2的全人源抗体重链和轻链可变区及相应Fab和全长抗体

说明书

技术领域

本发明涉及针对VEGFR2的全人源抗体重链和轻链可变区及相应的Fab和全长抗体。更具体而言，本发明涉及用噬菌体展示技术筛选出的针对VEGFR2的全人源抗体重链和轻链可变区以及含有所述可变区的抗体Fab片段和全长抗体。

背景技术

血管新生不仅在正常发育过程中起着关键作用，而且还在一些疾病发生过程中起着重要的作用，比如肿瘤。肿瘤细胞增殖、肿瘤体积变大必须伴随着血管新生为肿瘤细胞提供营养和氧气，同时排除代谢废物。

血管增生是一个复杂的生理过程，现有的证据表明失控的血管新生是肿瘤增殖及转移的主要原因。血管增生也和其他疾病密切相关，包括糖尿病视网膜病变，风湿性关节炎及银屑病等疾病。所以抑制血管新生成为治疗这些疾病的可行方法。

在血管新生过程中，血管内皮细胞生长因子VEGF(vascular endothelial growth factor)起着及其重要的作用，VEGF能强烈地刺激血管内皮细胞增殖。VEGF也被称作VEGF-A，VEGF家族还包括PIGF、VEGF-B、VEGF-C及VEGF-D等成员。VEGF调控正常及病理血管的生长，而VEGF-C和VEGF-D主要调控淋巴血管新生。其中VEGF基因表达通过选择性拼接其外显子产生4个异构体，分别是VEGF₁₂₁(含有121个氨基酸)、VEGF₁₆₅(含有165个氨基酸)、VEGF₁₈₉(含有189个氨基酸)和VEGF₂₀₆(含有206个氨基酸)。其中VEGF₁₆₅是主要的VEGF表达异构体，和各种生理及病理密切相关，它是一种分泌性蛋白质，但同时也能通过肝素结合到细胞表面和细胞外基质。分泌的VEGF以二聚体的形式存在，其中两个单体之间被两个二硫键连接在一起。VEGF是一种多功能的细胞激素，在低氧及致癌突变过程中能被诱导表达。VEGF是很强的血管渗透诱导剂、内皮细胞趋化剂、内皮细胞生存及增殖生长因子。

VEGF结合的受体包括VEGFR1（也被称作Flt-1）及VEGFR2(也被称作Flk-1)。现有的证据表明VEGFR2介导VEGF的多种效应，包括内皮细胞增殖、血管增生及渗透，尽管VEGF结合到VEGFR1的亲和力更高。而VEGFR1似乎并没有直接参与内皮细胞增殖和血管增生，但是VEGFR1参与了VEGF诱导单核细胞和巨噬细胞的迁移。

VEGFR1和VEGFR2属于III型受体酪氨酸激酶家族，其特征是胞外区由7个IgG样的结构域组成，中间含有一个细胞跨膜区，胞内含有一个酪氨酸激酶结构域。VEGFR3结合VEGF－C和VEGF－D，在淋巴管的发育过程中起作用。VEGF二聚体结合到VEGFR2以后诱发受体二聚体化，胞内酪氨酸激酶结构域的酪氨酸磷酸化，从而激活下游信号通路，包括激活磷脂酶C，增加细胞内钙离子浓度等。

所以VEGF及VEGFR2是很好的治疗靶点，抑制该信号通路理论上能够抑制血管新生，从而达到治疗血管新生相关的疾病。目前已有多个抑制VEGF信号通路的方法，包括VEGF人源化单克隆抗体、VEGFR小分子抑制剂等。鉴于VEGFR2在VEGF信号通路中的重要作用，抑制VEGFR2应该是一种抑制血管新生的策略。

针对VEGFR2的抑制性抗体可以用于治疗血管新生相关疾病，包括肿瘤如固体瘤和非固体瘤、新生血管性青光眼、冠状动脉疾病、炎症性疾病比如风湿性关节炎、眼科疾病比如糖尿病视网膜疾病和老年性视网膜黄斑退化等疾病。

抗体是一类重要的蛋白质分子用于治疗人类疾病。单克隆抗体由于其针对靶点的高度特异性已在临床上被广泛作为药物使用。抗体是一类糖蛋白，它们具有相同的结构特征。天然抗体通常是一类分子量为150kD的四聚体糖蛋白，由两个相同的轻链和两个相同的重链组成。其中每一条轻链通过二硫键和重链相连，两条重链之间也通过二硫键相连。每一条重链和轻链分别由可变区和恒定区组成。重链恒定区分为α、δ、ε、γ和μ，轻链恒定区分为kappa(κ)和lambda(λ)。可变区决定了抗体的特异性及其和抗原的亲和力。可变区包括3个高变区（CDR区）和4个框架区（FR区），两个框架区之间由一个高变区连接。重链的恒定区包含三个结构域（CH1、CH2和CH3），轻链的恒定区包含一个结构域CL。