[发明专利]用于检测志贺氏菌的方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的，本发明涉及用于检测志贺氏菌的方法和试剂盒。

背景技术

志贺氏菌(Shigella spp.）通称痢疾杆菌，是一类常见的具有高度传染性的肠道致病菌。根据生化反应和O抗原结构的不同，志贺氏菌可以分为痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae)、福氏志贺氏菌(S.flexneri)、鲍氏志贺氏菌(S.boydii)和宋内氏志贺氏菌(S.sonnei)。感染志贺氏菌可导致严重的胃肠道反应如脓血便、脱水，少数人引发系统并发症如惊厥、溶血性尿毒综合征、低钠血症、低血糖及肠穿孔，甚至死亡。

在我国广大农村地区由于卫生条件差，经常有由于水源或食品受到志贺氏菌污染而引起痢疾、腹泻等疾病流行的报道。因此，快速、有效、经济、简便地检测志贺氏菌的方法显得尤为重要。

但目前，对于志贺氏菌的检测仍然有各自的不尽人意之处：传统的增殖培养、生化试验、血清学试验检验虽然准确性好，但所需时间长；分子生物学方法，主要有常规PCR、多重PCR、实时PCR方法，虽然快速、灵敏、特异性强，但需要训练有素的专业技术人员，而且需要借助昂贵的检测设备(如定量PCR仪)及较高技术水平，不利于在一般实验室推广，因此目前仅限于海关、商检等国家级高等机构及部门采用；VITEK(全自动细菌生化分析仪)、VDAS(全自动免疫分析仪)等虽然快速、准确、检测量大，但费用颇高，不适合个别样本检测；基因芯片、蛋白质芯片准确、检测量大，但制作费用太高，亦不适合我国现阶段对于检测方法快速经济、简便准确的迫切要求。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种能有效检测志贺氏菌的试剂盒以及方法。

根据本发明实施例的用于检测志贺氏菌的试剂盒，包括：免疫磁珠，所述免疫磁珠用于对样品中的志贺氏菌进行富集；以及检测试剂条，所述检测试剂条为志贺氏菌双抗夹心检测卡，用于对样品中的志贺氏菌进行检测。由此，可以通过采用免疫磁珠进行富集，能够有效地缩短致病菌检测中最为耗时的增菌步骤。根据本发明的实施例，可以采用检测试剂条为志贺氏菌双抗夹心检测卡具有较高的特异性和灵敏性，且操作简便，无需专门设施和设备。特别适合食品、饲料、环境及临床样本的志贺氏菌检测与筛查。另外，本发明的志贺氏菌检测试剂盒的制备方法简便、稳定性好、重复性好。

参考图1，检测志贺氏菌双抗夹心检测卡由塑料卡壳及检测条组成，检测条安装在塑料卡壳之内。志贺氏菌检测条是由粘性底板6上依次粘贴聚酯膜1，样本垫2，玻璃纤维膜3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5，玻璃纤维膜上喷涂有胶体金标记的抗志贺氏菌单克隆抗体(或多克隆抗体)，硝酸纤维素膜上包被有抗志贺氏菌多克隆抗体(或单克隆抗体)作为检测线6和包被有抗鼠抗体作为质控线7。

根据本发明的实施例，所述免疫磁珠为纳米或亚微米磁珠，所述纳米或亚微米磁珠上偶联有抗志贺氏菌多克隆或单克隆抗体。由此，可以进一步提高检测效率。

根据本发明的实施例，所述磁珠与抗志贺氏菌抗体为亲合单点偶联。由此，可以进一步提高检测效率。

根据本发明的实施例，所述磁珠为链霉亲和素化磁珠，所述抗志贺氏菌抗体为生物素化抗志贺氏菌抗体。由此，可以进一步提高检测效率。

根据本发明的实施例，生物素化抗志贺氏菌抗体为长链生物素与抗志贺氏菌抗体通过共价偶联所得，其中，生物素与抗志贺氏菌抗体的摩尔比低于1:1。由此，可以进一步提高检测效率。

根据本发明的实施例，抗志贺氏菌多克隆或单克隆抗体对于痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae)、福氏志贺氏菌(S.flxneri)、鲍氏志贺氏菌(S.boydii)和宋内氏志贺氏菌(S.sonnei)的至少一种志贺氏菌血清型均呈阳性反应，对新生霉素抗性细菌呈阴性反应。由此，可以进一步提高检测效率。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种利用前面所述的试剂盒检测志贺氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用所述免疫磁珠对待检测的样品中的志贺氏菌进行富集，以便获得志贺氏菌经过富集的样品；以及利用所述检测试剂条对所述志贺氏菌进行检测。由此，可以通过采用免疫磁珠进行富集，能够有效地缩短致病菌检测中最为耗时的增菌步骤。根据本发明的实施例，可以采用检测试剂条为志贺氏菌双抗夹心检测卡具有较高的特异性和灵敏性，且操作简便，无需专门设施和设备。特别适合食品、饲料、环境及临床样本的志贺氏菌检测与筛查。另外，本发明的志贺氏菌检测试剂盒的制备方法简便、稳定性好、重复性好。