[发明专利]用于检测志贺氏菌的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测志贺氏菌的试剂盒，其特征在于，包括：

免疫磁珠，所述免疫磁珠用于对样品中的志贺氏菌进行富集；以及

检测试剂条，所述检测试剂条为志贺氏菌双抗夹心检测卡，用于对样品中的志贺氏菌进行检测。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫磁珠为纳米或亚微米磁珠，所述纳米或亚微米磁珠上偶联有抗志贺氏菌多克隆或单克隆抗体。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠与抗志贺氏菌抗体为亲合单点偶联。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠为链霉亲和素化磁珠，所述抗志贺氏菌抗体为生物素化抗志贺氏菌抗体。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，生物素化抗志贺氏菌抗体为长链生物素与抗志贺氏菌抗体通过共价偶联所得，其中，生物素与抗志贺氏菌抗体的摩尔比低于1:1。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，抗志贺氏菌多克隆或单克隆抗体对于痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae)、福氏志贺氏菌(S.ftexneri)、鲍氏志贺氏菌(S.boydii)和宋内氏志贺氏菌(S.sonnei)的至少一种志贺氏菌血清型均呈阳性反应，对新生霉素抗性细菌呈阴性反应。

7.一种利用权利要求1~6任一项所述的试剂盒检测志贺氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用所述免疫磁珠对待检测的样品中的志贺氏菌进行富集，以便获得志贺氏菌经过富集的样品；以及

利用所述检测试剂条对所述志贺氏菌进行检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在进行富集之前，预先对所述样品进行增菌处理。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品预增菌：以无菌操作取检样25g或液体样本25mL，加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min~10000r/min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1~2min，并将均质后的样品于40℃±1℃，厌氧培养10h；

2)使用权利要求1~6任一项所述试剂盒，借助所述免疫磁珠进行磁分离富集：取1mL预增菌菌液加入到2mL离心管，向其中加入50μL浓度为2mg/mL的所述免疫磁珠，室温下在旋转混合仪上10rpm反应30min，后取下，磁力架分离，弃去上清。最后用100μL pH=7.2的PBS重悬磁珠；

3)检测前灭活与处理：将所得到的磁珠重悬液于90℃水浴上水浴5min，所得液体于磁场中进行磁分离，取清液为样本待检液；

4)将步骤3)所得待检液取80μL滴加于所述志贺氏菌双抗夹心检测卡，5~10min内判读结果。