[发明专利]生物法制备高纯度L-叔亮氨酸

权利要求书

1.一种生物合成制备L-叔亮氨酸的方法，是将表达亮氨酸脱氢酶基因和甲酸脱氢酶基因大肠杆菌种子液接入自诱导系统发酵培养基中发酵培养，离心得到粗菌体，加入缓冲溶液得到细胞悬浮液。然后加入底物三甲基丙酮酸和甲酸铵进行生物催化反应，获得L-叔亮氨酸转化液。转化液离心，调节溶液pH，柱层析，解析，浓缩得到高纯度产品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述自诱导系统发酵培养基由下列重量份的物质组成：0.5-1.5％胰蛋白胨，0.1-1.0％酵母浸出物，10-50mM Na₂HPO₄，10-50mM KH₂PO₄，20-100mM NH₄Cl，1-10mM Na₂SO₄，1-10mM MgSO₄，0.1-1.0％甘油，0.01-0.1％葡萄糖，0.1-0.5％乳糖，50-120μM FeCl₃。

3.根据权利要求1所述的方法，所述发酵培养的温度为30-42℃，搅拌转速为120-250转/分钟，pH值为6.0-7.5，发酵时间为12-24小时。

4.根据权利要求1所述的方法，所述重组细胞悬浮液的制备方法为：发酵液离心得粗菌体，用pH6.0-7.0磷酸缓冲液洗涤和悬浮，获得细胞悬浮液。

5.根据权利要求4所述的方法，所述细胞悬浮液中菌体的质量百分含量为1％-20％，优选为15％。

6.根据权利要求1所述的方法，所述底物中，三甲基丙酮酸终浓度为160g/L，初始加入浓度为60-80g/L，剩余的三甲基丙酮酸在反应时间内连续流加完毕，甲酸铵加入浓度为100-130g/L。

7.根据权利要求1所述的方法，所述生物合成反应条件是，反应温度25-35℃，pH值为8.5-9.5，反应时间12-24h。

8.根据权利要求1所述的方法，所述调节溶液pH是将pH值用稀盐酸调节至5-8，然后上样于所述层析柱中，依次用水溶液和氨水溶液进行洗脱，收集含产品的洗脱液。浓缩，结晶，既得产品。

9.根据权利要求1所述的方法，所述层析柱中的介质为离子交换树脂。

10.根据权利要求9所述的方法，所述离子交换树脂优选为强酸性阳离子型树脂。