[发明专利]一种分程胚胎培养液及其配制方法

权利要求书

1.一种分程胚胎培养液，包括基本培养液和胚胎营养因子，其特征在于：

所述基本培养液包括无机盐缓冲液、氨基酸、丙酮酸钠、乳酸钠、葡萄糖和血清白蛋白；

所述胚胎营养因子包括PAF、IGF-1和GM-CSF的任意一种或多种。

2.根据权利要求1中任意一项所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：所述无机盐缓冲液包括氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸镁、碳酸氢钠和EDTA二钠。

3.根据权利要求2所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：

所述氯化钾与氯化钠的摩尔比为1.8~2.2:100；

所述磷酸二氢钾与氯化钠的摩尔比为0.3~0.4:100；

所述氯化钙与氯化钠的摩尔比为1.6~1.8:100；

所述硫酸镁与氯化钠的摩尔比为0.18~0.22:100；

所述碳酸氢钠与氯化钠的摩尔比为20~30:100；

所述EDTA二钠与氯化钠的摩尔比为0.01:100。

4.根据权利要求1~3中任意一项所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：所述胚胎营养因子由PAF、IGF-1和GM-CSF组成，用于配制受精卵体外生长至8-细胞期的卵裂液培养液。

5.根据权利要求1~3中任意一项所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：所述胚胎营养因子由IGF-1和GM-CSF组成，用于配制体外受精卵从8-细胞期至植入前的囊胚液培养液。

6.根据权利要求4所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：所述PAF浓度为20ng/毫升，所述IGF-1浓度为2ng/毫升；所述GM-CSF浓度为2ng/毫升。

7.根据权利要求4所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：

所述乳酸钠和氯化钠的摩尔比为10.5:100；

所述丙酮酸钠和氯化钠的摩尔比为0.32:100；

所述葡萄糖和氯化钠的摩尔比为0.5:100。

8.根据权利要求4所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：每毫升基本培养液含有3mg血清白蛋白。

9.根据权利要求5所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：所述IGF-1浓度为5ng/毫升；所述GM-CSF浓度为4ng/毫升。

10.根据权利要求5所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：

所述乳酸钠和氯化钠的摩尔比为5.87:100；

所述丙酮酸钠和氯化钠的摩尔比为0.1:100；

所述葡萄糖和氯化钠的摩尔比为3.15:100。

11.根据权利要求5所述的一种分程胚胎培养液，其特征在于：每毫升基本培养液含有4mg血清白蛋白。

12.如权利要求4所述的分程胚胎培养液的配制方法，其特征在于：先配制基本培养液，将PAF预先存放在有机溶剂中，配制时吸取PAF于清洁的硅化玻璃管中，注入氮气将有机溶剂挥发，加入含有血清白蛋白的基本培养液，涡旋混合，避免气泡产生，于25℃水箱水浴孵化1小时使PAF与血清蛋白充分结合，再加入含有血清白蛋白的基本培养液配制到浓度为20ng/毫升；将高于终浓度200倍的IGF-1和GM-CSF完全溶于超纯水中，再加入含有血清白蛋白的基本培养液分别稀释至终浓度2ng/毫升和2ng/毫升。

13.如权利要求5所述的分程胚胎培养液的配制方法，其特征在于：配制基本培养液，将高于终浓度200倍的IGF-1和GM-CSF完全溶于超纯水中，再加入含有血清白蛋白的基本培养液分别稀释至终浓度5ng/毫升和4ng/毫升。