[发明专利]一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法

权利要求书

1.一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，利用PCR技术对基因组多拷贝基因的拷贝数的快速批量测定方法，第一步，抽提待测生物个体DNA样品，对需测定的多拷贝基因(X₁、X₂、X₃……Xn)和作为内参已知单拷贝基因(Y)进行PCR扩增引物设计；第二步，以个体DNA样品为模板对各基因(X₁、X₂、X₃……Xn、Y)进行PCR扩增，并对PCR产物纯化；第三步，测定各基因的PCR纯化产物的质量浓度，并根据其核酸序列，将质量浓度换算成摩尔浓度，分别为M₁、M₂、M₃......M_n、M_Y；第四步，分别对各基因的PCR纯化产物进行梯度稀释；第五步，分别以梯度稀释后各基因的PCR纯化产物和组织DNA样本作为模板，通过同一RT-PCR反应制作这些基因的标准曲线，同时获得在组织DNA样品中各基因的含量(Ct值)；第六步，通过各个基因的标准曲线和组织DNA样品中各基因的表达量，计算出各基因的摩尔浓度m₁、m₂、m₃……m_n、m_Y，；第七步，根据在同一组织DNA样品中多拷贝基因的数量是单拷贝基因的拷贝数的倍数关系，通过一套方程组联解得到所测基因在基因组中的拷贝数。

2.根据权利要求1所述的一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，其特征在于：所使用的多拷贝基因和单拷贝基因的引物皆为普通PCR引物，不需要昂贵的且难设计的TaqMan PCR荧光探针。

3.根据权利要求1所述的一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，其特征在于：所述的摩尔浓度是对多拷贝基因和单拷贝基因的PCR产物进行纯化处理后测定。

4.根据权利要求1所述的一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，其特征在于：所述的同一RT-PCR反应是在同一次荧光定量反应中分别加入以梯度稀释后，以确保以组织DNA为模板和以纯化后的PCR产物为模板的基因的扩增效率一致。

5.根据权利要求1所述的一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，其特征在于：所述的组织DNA样品中各基因的摩尔浓度是通过该基因的标准曲线和样品中该基因的Ct值。