[发明专利]芹菜籽活性单体的分离纯化制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及芹菜籽活性单体分离纯化领域，具体为一种芹菜籽活性单体的分离纯化制备工艺。

背景技术

芹菜籽是芹菜的干燥成熟果实，具有散气、消肿、止痛、利尿、降血压的作用。目前对其含有的挥发油成分研究的比较多，但对其含有的黄酮类化合物的相关研究很少。黄酮类化合物具有众多的生理功能和药用价值，其主要作用有：延缓衰老、增强心血管功能、抗炎、抗过敏、抑菌、抗病毒、抗溃疡作用、降血糖作用、抗辐射和抗肿瘤等，而且在食品（及食品添加剂）、保健品、化妆品以及药品的开发方面也有很好的应用前景。研究表明，芹菜籽中有丰富的黄酮类化合物。

目前，黄酮的提取分离方法主要有索氏提取法、微波辅助提取法、超声波提取法等，单体的分离主要采用传统的硅胶柱层析或者制备液相色谱技术分离得到，传统的分离方法耗时费力，一次实验等到的单体种类少而量小，不能满足药理研究及质量控制的需要。

发明内容

本发明针对以上不足之处，提供了一种芹菜籽活性单体的分离纯化制备工艺，快速、高效的实现芹菜籽活性单体的高纯度的分离纯化。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种芹菜籽活性单体的分离纯化制备工艺，包括如下步骤：

（1）将芹菜籽放置在温度为25°C～35°C的条件下进行低温干燥48小时，然后将其粉碎至100目；

（2）将得到的芹菜籽干燥粉末使用超临界萃取装置进行萃取，使用超临界二氧化碳为萃取剂，在压力为25MPa～30 MPa 、温度为40°C～50°C、萃取剂流速为40L/h的条件下进行萃取，在压力为6MPa 、温度为30°C～40°C的条件下进行分离，得到芹菜籽的油状萃取物；

（3）将上一步中得到的芹菜籽的油状萃取物使用高速逆流色谱仪进行分离纯化，溶剂体系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例为5:5:7:3（v/v)，形成互不相溶的上下两相，以上相作为固定相，固定相的保留率为50%～60%，将1克芹菜籽的油状萃取物溶解于3ml～6ml等量的上相与下相中，进行进样，在分离过程，流速为2ml/min，转速为750rpm～850rpm，检测波长为254nm，根据逆流色谱图谱，收集所需组分；

（4）将上一步收集到的组分利用旋转蒸发仪低温蒸干，蒸干温度30°C～40°C，蒸干后向蒸馏瓶内加入1～3ml色谱纯甲醇溶出，装入已称量好的小样品瓶内，－40°C冷冻干燥至干，称重，分别得到高纯度活性单体I（3-n-butyl-4, 5-dihydrophthalide），II （sedanolide），

III 1, 3-Di [(cis)-9-octadecenoyl]-2-[(cis, cis)-9, 12-octadecadienoyl] glycerol。 

优选的一种芹菜籽活性单体的分离纯化制备工艺，包括如下步骤：

（1）将芹菜籽放置在温度30°C的条件下进行低温干燥48小时，然后将其粉碎至100目；

（2）将得到的芹菜籽干燥粉末使用超临界萃取装置进行萃取，使用超临界二氧化碳为萃取剂，在压力为25MPa ，温度为45°C，萃取剂流速为40L/h的条件下进行萃取，在压力为6MPa ，温度为35°C的条件下进行分离，得到芹菜籽的油状萃取物；

（3）将上一步中得到的芹菜籽的油状萃取物使用高速逆流色谱仪进行分离纯化，溶剂体系是石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，比例为5:5:7:3（v/v)，形成互不相溶的上下两相，以上相作为固定相，固定相的保留率为55%，将1克芹菜籽的油状萃取物溶解于4ml等量的上相与下相中，进行进样，在分离过程，流速为2ml/min，转速为800rpm，检测波长为254nm，根据逆流色谱图谱，收集所需组分；

（4）将上一步收集到的组分利用旋转蒸发仪低温蒸干，蒸干温度30°C～40°C，蒸干后向蒸馏瓶内加入1～3ml色谱纯甲醇溶出，装入已称量好的小样品瓶内，－40°C冷冻干燥至干，称重，分别得到高纯度活性单体I（3-n-butyl-4, 5-dihydrophthalide），II （sedanolide），III 1, 3-Di [(cis)-9-octadecenoyl]-2-[(cis, cis)-9, 12-octadecadienoyl] glycerol。 

在以上步骤中超临界萃取过程中所使用的萃取剂超临界二氧化碳的纯度为99.999%，所用的石油醚，乙酸乙酯，甲醇为分析纯，水为去离子水。

本发明的有益效果是：