[发明专利]一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母

权利要求书

1. 一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母，其特征在于该基因重组酿酒酵母是将内切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。

2. 根据权利要求1所述的基因重组酿酒酵母，其特征在于所述的酿酒酵母表达载体为酿酒酵母多基因共表达载体。

3. 根据权利要求2所述的基因重组酿酒酵母，其特征在于所述酿酒酵母多基因共表达载体为载体pScIKP。

4. 权利要求1至3任一项所述的基因重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将内切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因接入酿酒酵母表达载体中，构建重组双基因共表达载体；

S2.将上述构建得到的重组双基因共表达载体用限制性内切酶切割，使之线性化后转化到酿酒酵母中，构建转基因酿酒酵母。

5. 根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，S1构建重组双基因共表达载体包括如下步骤：

S11.分别将内切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因进行PCR扩增；

S12.用限制性内切酶分别切割载体、内切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因；

S13.将内切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因接入酿酒酵母表达载体中。

6. 根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，S2中所述的限制性内切酶为Apa I。

7. 根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，S2中所述的转化是使用电转化法、冷冻法或化学试剂法进行转化。

8. 根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，S12中用于切割内切β-1,4-葡聚糖酶基因的限制性内切酶为BamH I和Spe I，用于切割β-葡萄糖苷酶基因的限制性内切酶为Spe I；S13中使用的限制性内切酶为Nhe I和Xba I。

9. 根据权利要求1、4、5或8所述的构建方法，其特征在于，所述的内切β-1,4-葡聚糖酶基因为绿色木霉的内切β-1,4-葡聚糖酶基因eg3；所述的β-葡萄糖苷酶基因为绿色木霉的β-葡萄糖苷酶基因bgl1。