[发明专利]一种利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡。

背景技术

布鲁氏菌为革兰氏阴性短小杆菌，初次分离时多呈球状，球杆状和卵圆形，该菌传代培养后渐呈短小杆状，菌体无鞭毛，不形成芽胞。1985年WHO布鲁氏菌病专家委员会把布鲁氏菌属分为6个种19个生物型，即羊种(生物型1～3)，牛种(生物型1～7.9)，猪种(生物型1～5)及绵羊型副睾种，沙林鼠种，犬种(各1个生物型)。临床上以羊、牛、猪三种意义最大，羊种致病力最强。布鲁氏菌引起的人类疾病还有以下几种名称：马尔他热、地中海弛张热、波浪热或波状热。牛布鲁氏菌病在我国广泛存在，致病力也很强，尤其以畜牧生产为主的东北、华北、西北一带，经常有疫情爆发的报道，直接危害人类的健康，严重困扰畜牧业的发展和动物及其产品的进出口贸易。

目前牛布鲁氏菌病的诊断手段主要包括病原分离鉴定、虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)酶联免疫吸附试验(ELISA)、PCR等。病原分离鉴定耗时长，操作步骤繁琐，只适合于实验室的研究需要，不具有实用价值；补体结合试验容易引起溶血反应，应用的局限性很大，试管凝集试验为半定量试验方法，容易出现假阳性反应，且不易检测出样品中所含抗体的含量；虎红平板凝集试验也存在较高的假阳性反应，需要改进；酶联免疫吸附试验灵敏度高，定量效果好，为一种广泛应用的免疫学检测方法，但是，该方法操作比较麻烦，定性和定量需要专业人士的分析才能确定，不适合在基层、农村等单位大规模检测使用。

免疫胶体金技术自问世以来，得到了迅速发展。广泛应用于化学检测和免疫学检测领域，尤其是胶体金免疫层析技术具有操作简单、快速灵敏、结果清楚、易于判断和保存，且无需任何仪器设备等优点。更适合于临床快速诊断和基层、农村等流行病学调查大规模应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种敏感度高、特异性好、操作简单、低成本的利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体现场快速检测试纸卡及其检测方法。

一种利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，所述检测试纸卡由外壳1和其内部的试纸条2构成，外壳1由上板3和下板4构成，上板3有检测窗5和加样孔6，试纸条2由底板7和在底板7上依次粘贴的样品吸收垫8、胶体金标记垫9、检测反应区10构成，样品吸收垫8正对加样孔6，检测反应区10正对检测窗5。

所述底板7的材质为硝酸纤维膜。

所述胶体金标记垫9包被有牛布鲁氏菌抗原-胶体金标记物。

所述牛布鲁氏菌抗原-胶体金标记物的制备方法为：

(1)将牛布鲁氏菌抗原在0.005M/L pH7.0的NaCl溶液中4℃透析过夜，4℃，10000-12000rpm条件下离心1h；

(2)将OD526的胶体金溶液的pH调节至4.0-9.0；

(3)将步骤(1)离心得到的牛布鲁氏菌抗原用0.005M/L pH9.0的硼酸盐缓冲溶液稀释至5μg/ml～50μg/ml，取1ml稀释后的牛布鲁氏菌抗原加入到1ml胶体金溶液中，振荡混匀，静置5min，加入0.1ml10％的NaCl溶液，混匀后静置2h，离心纯化制得胶体金标记的牛布鲁氏菌抗原。

所述检测反应区10由包被牛布鲁氏菌抗体的测试区T和包被牛布鲁氏菌二抗的质控区C组成。

所述样品吸收垫含有植物凝集素或抗红细胞抗体。

所述抗红细胞抗体为使用人红细胞免疫小鼠、羊或兔，常规制备的抗红细胞单克隆抗体。

上述检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡的检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)血液样品处理：血液标本收集在洁净、干燥的容器内，将采集的新鲜血液加入浓度为2.5％抗凝剂；

(2)取经过处理的血液样品100μL，滴入加样孔；

(3)待血液样品流过测试区和质控区，判定样品中是否含有牛布鲁氏菌抗体，判定规则如下：

阳性(-)：仅质控区出现一条紫红色条带，在测试区内无紫红色条带出现；

阴性(+)：两条紫红色条带出现，一条位于测试区内，另一条位于质控区内；

无效：当质控区不显示出紫红色条带，则无论测试区显示出紫红色条带与否，该试纸卡判为无效。