[发明专利]真菌Glarea lozoyensis及其在调控微生物代谢物纽莫康定B0中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型微生物及其应用，尤其涉及一种真菌Glarea lozoyensis及其通过调控微生物代谢获得纽莫康定B₀的应用。 

背景技术

棘白菌素又称棘球白素，是一类新型抗真菌药，属于乙酰六环类，对人体的毒性低，是一种水溶性的脂肽，主要用于治疗念珠菌食道炎或口咽炎、侵入性曲霉菌病及其他抗真菌药治疗无效或不能耐受者，对卡氏肺孢菌也有作用，通过抑制真菌细胞壁重要组成成分β(1,3)-D-葡萄糖的合成而发挥抗真菌作用。卡泊芬净（Caspofungin）是第一个批准上市的棘白菌素类抗真菌药。对于治疗持续发热及中性粒细胞较少患者，卡泊芬净作为经验性治疗，其安全性、生存率及有效率均较高，耐受性更好，治疗真菌感染和念珠菌败血症也有效，能杀灭正在生长的烟曲霉细胞。 

卡泊芬净是由纽莫康定B₀（Pneumocandin B₀）经过结构修饰后得到。其中纽莫康定B₀是真菌（Glarea lozoyensis）的微生物代谢产物，可以通过调控真菌（Glarea lozoyensis）的微生物代谢也即发酵产生，经提取纯化后再经过多步反应合成得到卡泊芬净。一般的纽莫康定B₀产生菌，生产能力不稳定，产量较低，发酵副产物较多，杂质也较多，导致后提取工艺较为复杂，大大地增加了后续的提纯难度，并且难以获得高纯度的最终产物，从而难以更好地进行产业化生产。 

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种发酵单位高、能稳定生产、产量高且副产物少的纽莫康定B₀产生菌。 

本发明的另一目的是提供该菌株在制备纽莫康定B₀中的应用，以及具体的发酵制备方法。 

本发明的目的是通过下列技术方案实现的： 

一种真菌FIM2006071，分类命名为Glarea lozoyensis FIM2006071，由中国典型培养物保藏中心保藏（简称CCTCC），保藏号为：CCTCC NO：M2012475，保藏日期为：2012年11月23日。 

所述的保藏号为CCTCC NO：M2012475的菌株是从福建省福州筛选得到的。 

所述的保藏号为CCTCC NO：M2012475的菌株的菌落特征：菌落近圆形，边缘白色，不规则扇形，菌落直径7.5-17.8mm，菌落隆起，中心形成纽结或陷落成坑，中间无分泌物和可溶性色素产生。 

根据微生物形态学及国外相关资料的描述，结合保藏号为CCTCC NO：M2012475的菌株的各种培养特征，该保藏号为CCTCC NO：M2012475的菌株属于真菌属，定名为Glarea lozoyensis FIM2006071。 

所述的保藏号为CCTCC NO：M2012475的菌株可应用于发酵制备纽莫康定B₀。该制备方法包括下列步骤： 

a．菌株采用保藏编号为CCTCC NO：M2012475的菌株； 

b．将按常规方法制备的30%甘油菌丝冷冻管按摇瓶种子培养基体积的3-5%的接种量接入摇瓶种子培养基，220-260rpm，培养2-3天，得摇瓶种子液；将摇瓶种子液按种子罐培养基体积0.1-0.2%的接种量接种于种子罐，120-200 rpm，培养3-4天，得罐种子液；将罐种子液按发酵体积的5-15%的接种量接种于发酵罐培养基，150-200 rpm，发酵培养9-12天，收集发酵液；其中培养温度均为22-26℃。 

其中所述的摇瓶种子培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源1-8g，氮源2-8g，无机盐0-2.5g，其余为水； 

种子罐培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源2-8g，氮源1-7g，无机盐0-2.5g，其余为水； 

发酵培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源8-16g，氮源1-5g，无机盐0-1g，氨基酸0-2g，其余为水。 

其中所述的培养基各组分在培养基中比例，优选为： 

摇瓶种子培养基各组分的比例为：每100mL培养基中，碳源2-4g，氮源4-6g，无机盐1-2g，其余为水； 

种子罐培养基各组分的比例为：每100mL培养基中，碳源4-6g，氮源3-5g，无机盐0.5-1.5g，其余为水；