[发明专利]一种应用于胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物学和医学领域，具体的说是一种应用于胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化液及其制备方法。

背景技术

胰岛移植目前已成为治疗I型糖尿病的理想途径之一。能否分离出大量高纯度，高活性的胰岛是成功胰岛移植的首要前提。目前临床及试验中广泛采用的胰岛纯化方法为梯度密度离心法，该方法利用胰岛与腺细胞的密度差异将胰岛纯化。然而这种分离方法会损失大量胰岛，并且由于梯度分离液的毒性导致胰岛活性及功能受损，最终使移植效果下降。因此找到一种具有良好分离效率以及具有良好胰岛保护作用的梯度密度分离液成为研究胰岛移植的学者们的重要目标之一。

梯度密度分离液一般由提供基础密度的基础成分与配合成分构成。目前应用较多的梯度液配合成分主要为Euro-colin、UW液等等。UW液是一种密度为1.0456的器官保存液，广泛的用于多种器官移植前的器官保存，已经成为胰腺保存液的金标准。有实验证实应用UW液与Euro-Ficoll组成的新型分离液与单独应用Euro-Ficoll相比增强了人胰岛的产量、纯度与活性。然而胰岛是一种具有高度代谢活性的细胞团，且其分离过程与器官保存过程不尽相同，而UW液是为多器官保存而设计的，它并不适合胰岛的分离过程，而且价格昂贵.

随着外科手术、免疫抑制药物、胰岛分离纯化技术的迅速发展，胰岛移植已成为治疗糖尿病的理想途径之一。然而目前在胰岛分离纯化过程中仍然没有一种专门用于胰岛分离纯化分离液，应用UW液等器官保存液仍然面临着纯化效率低下，胰岛保护作用差等问题，因此，目前迫切需要研发一种分离效率高、胰岛保护作用强、成本低的胰岛分离纯化液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种应用于胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化液及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种应用于胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化液：每1000ml分离纯化液为乳糖酸30-40g；L-组氨酸4.0-30.0g；棉子糖15-20g；NaOH4.0-5.0g；KOH0.35-0.45g；腺苷1.0-1.5g；别嘌呤醇0.1-0.2g；NaH₂PO₄3.0-4.0g；MgSO₄·7H₂O1.0-1.5g；CaCl₂·2H₂O0.05-0.1g；谷胱甘肽0.5-1.0g；聚乙二醇-2020-30g；乌司他丁10-15万单位；余量为注射用水。

所述分离纯化液pH值控制在7.3-7.4于23℃下保存待用。所述分离纯 化液使用前与基础密度的分离液混合成梯度分离液，进而应用于胰岛移植中胰岛的分离。

应用于胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化液的制备方法：每1000ml分离纯化液配制量，按上述比例依次加入乳糖酸30-40g；L-组氨酸4.0-30.0g；棉子糖15-20g；NaOH4.0-5.0g；KOH0.35-0.45g；腺苷1.0-1.5g；别嘌呤醇0.1-0.2g；NaH₂PO₄3.0-4.0g；MgSO₄·7H₂O1.0-1.5g；CaCl₂·2H₂O0.05-0.1g；谷胱甘肽0.5-1.0g；聚乙二醇-2020-30g；乌司他丁10-15万单位，再调整pH值至7.3-7.5，而后用注射用水定容，即得分离纯化液。

将上述分离纯化液用活性炭进行搅拌吸附，搅拌后滤除炭及滤除菌，于4℃保存，待用。

具体配置为：

1）预溶解，将0.2-0.4g的CaCl₂·2H₂O溶于20ml注射用水备用；将1.0-1.5g的MgSO₄·7H₂O溶于10ml注射用水备用；将4.0-30.0g的L-组氨酸溶于200ml注射用水中备用；将20-30g聚乙二醇-20加热溶于200ml注射用水中备用；

2）混合：