[发明专利]高效裂解串联基因，高效裂解质粒及构建方法和应用

权利要求书

1.一种高效裂解串联基因，其特征是基因序列如序列表中序列3所示。

2.根据权利要求1所述的高效裂解串联基因，其特征是由噬菌体PhiX174突变裂解基因mE和葡萄球菌核酸酶A基因SNA串联组成的。

3.含有上述权利要求1或2所述的高效裂解串联基因的高效裂解质粒。

4.根据权利要求3所述的高效裂解质粒，其特征是将权利要求1或2所述的高效裂解串联基因酶切插入pBV220载体中。

5.一种权利要求3或4所述的高效裂解质粒的构建方法，其特征是包括以下步骤：

（1）以噬菌体PhiX174 RFI DNA为模板、以序列表中的序列4和序列5为引物进行PCR扩增，获得突变裂解基因E；

（2）以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板、序列表中序列6和序列7为引物进行PCR扩增，获得葡萄球菌核酸酶A基因；

（3）将步骤（1）中得到的突变裂解基因E和步骤（2）中得到的葡萄球菌核酸酶A基因作为下一步PCR反应的模板，用序列表中的序列4和序列7进行扩增，得到串联基因；

（4）将串联基因应用EcoR I和Sal I限制性内切酶进行双酶切，酶切产物与经EcoR I和SalI双酶切的pBV220载体连接，得到高效裂解质粒。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征是将步骤（4）得到的高效裂解质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，30℃过夜培养16 h，挑取单菌落于氨苄青霉素抗性的LB培养基中30℃过夜振荡培养，提取质粒，保留鉴定为阳性的质粒。

7.一种权利要求3或4所述的高效裂解质粒在制备菌蜕中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述菌蜕为肠杆菌科的菌蜕。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征是包括以下步骤：

（1）将含有所述高效裂解质粒的大肠杆菌DH5α在30℃培养至OD₆₀₀值达到1.0-1.2；

（2）培养温度升高至42℃诱导高效裂解串联基因的表达；

（3）在升温诱导90 min时添加终浓度为10mM的 CaCl₂和1mM 的MgCl₂，来激活SNA的活性；

（4）升温诱导4h时，收集步骤（3）获得的菌蜕，洗涤后保存。