[发明专利]一种滁菊离体NaN3诱变育种技术

权利要求书

1.一种滁菊离体NaN₃诱变育种技术，其特征在于,在离体培养的条件下利用NaN₃对滁菊进行诱变育种。

2.根据权利要求书1所述的诱变育种技术，其特征在于，所述的诱变育种过程包括①滁菊离体培养苗的制备、②NaN₃化学诱变、③诱变苗的促壮生根、④炼苗和田间栽培、⑤田间选择和室内鉴定，其具体步骤如下：

①离体培养苗的制备：

将滁菊幼茎和嫩叶用中性洗衣粉洗涤并冲洗干净，然后进行表面消毒，将消毒后的幼茎用无菌水漂洗4-5次，然后：

a）将带腋芽茎段或嫩茎尖外植体接种于：MS+NAA 0.1mgL-1培养基，每瓶接种外植体2-3个，20-30天再继代一次，形成大量的无菌苗；

b）或将嫩叶外植体接种于丛芽分化培养基：MS+TDZ 0.1-0.2mgL-1+ NAA0.1-0.2mgL-1或MS+KT 3-4mgL-1+NAA0.1-0.4mgL-1，培养40-50d形成丛芽（图1）；

②NaN₃化学诱变：

选择生长15d-20d的无菌苗切成带腋芽茎段或剥离茎尖接种于含有NaN₃诱变剂的MS+TDZ 0.1-0.2mgL-1+NAA0.1-0.2mgL-1或MS+KT 3-4mgL-1+NAA0.1-0.4mgL-1丛芽分化培养基上，处理35d-45d，使部分茎尖、叶腋或茎段基部形成丛芽（图2、图3）；

③诱变苗的促壮生根

将诱变处理形成的丛芽转移到MS+NAA 0.1mgL-1的壮苗培养基上，培养15-20d形成壮苗（图4），将壮苗切成带腋芽茎段接种在1/2MS+NAA 0.1mgL-1的培养基上生根培养7-10d（图5）；

④炼苗和田间栽培

将生根苗移栽到细沙育苗盘中，炼苗30-40d，而后定植到大田，进行常规管理；

⑤田间选择和室内鉴定

在开花期根据育种目标要求，在田间选择花朵性状优良的植株（图6），并在室内进行鉴定（图7）。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤①中所述的表面消毒的方法为75%乙醇处理30-90sec，然后用0.1%HgCl2溶液灭菌6-10min。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的表面消毒的最佳方法为75%乙醇处理60sec，然后用0.1%HgCl2溶液灭菌8min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤②中，在增殖培养基中添加4-10mgL-1 NaN3处理35-45d。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤②中，在增殖培养基中添加NaN3最佳处理浓度6-8mgL-1，处理40-45d。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤①、②和③所述的培养基内琼脂粉的添加量为0.45%。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述离体培养的条件是：培养温度23±2℃，每天光照12h，光照强度1500-2000Lx。