[发明专利]一种培养重组禽流感病毒H5N1亚型的方法

权利要求书

1.一种重组禽流感病毒H5N1亚型的大规模培养的方法，包括如下步骤：

（1）将MDCK细胞接种潮汐式高密度细胞培养系统，并加入细胞生长液进行培养。

（2）将所述步骤（1）所得到的细胞接种含重组禽流感病毒H5N1亚型的病毒生长液，进行病毒的培养。

（3）接毒后2～4天收获所述步骤（2）得到的病毒生长液。

其中，上述方法使用的潮汐式高密度细胞培养系统已含细胞培养载体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中的潮汐式高密度细胞培养系统为潮汐式高密度细胞培养系统，包括TideCell-010系统、TideCell-020系统或TideCell-100系统。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中的重组禽流感病毒H5N1亚型为以流感病毒PR/8的6个内部基因为供体重新构建的一系列的H5N1亚型禽流感病毒。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述重组禽流感病毒H5N1亚型包括重组禽流感病毒H5N1亚型Re-1株、重组禽流感病毒H5N1亚型Re-4株、重组禽流感病毒H5N1亚型Re-5株和重组禽流感病毒H5N1亚型Re-6株。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中的培养温度为37℃，CO₂含量为5%。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中的细胞生长液为95%体积百分比的DMEM液和5%体积百分比的新生牛血清。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中的培养温度为34℃，CO₂含量为5%。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中接种时的病毒接种量为含禽流感病毒MOI10^-4～10^-6的病毒生长液。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中的病毒生长液为5μg/ml质量体积比的TPCK处理胰酶、0.2%体积百分比的牛血清白蛋白组分V的DMEM液。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的细胞生长液和步骤（2）中的病毒生长液的PH值为7.0～7.4。