[发明专利]抗上皮细胞粘附分子和T细胞抗原的双特异性抗体

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗相关抗体，更具体的，基因工程抗体领域。

背景技术

目前的研究已知上皮细胞粘附分子(EpCAM，Epithelial cell adhesion molecule；CD326)是糖基化的I型跨膜糖蛋白，分子量为30到40kD，其结构包括一个表皮生长因子样，一个甲状腺球蛋白样的胞膜外区，一段跨膜区和一段26氨基酸的胞浆区。EpCAM主要定位于上皮细胞之间，以定向和高度有序的方式起作用来粘附上皮细胞。而一旦上皮细胞恶性转化，快速生长的肿瘤细胞将废弃上皮细胞的高度有序性。结果，EpCAM的表面分布变得较少受约束并且分子更多地暴露于肿瘤细胞上。大多数肿瘤细胞由于其上皮细胞的来源，其表面表达有EpCAM[7]。因此EpCAM可以成为对表面表达有该种分子的肿瘤细胞和肿瘤干细胞进行抗体免疫治疗的靶位点。

目前已有大量以EpCAM为靶标的免疫治疗研究开展，例如Adecatumumab，Catumaxomab，和一种抗EpCAM/CD3三功能抗体已进入临床试验研究阶段。其中Catumaxomab抗体在治疗结肠癌/胃癌/或胰腺癌中的效果，Adecatumumab抗体针对前列腺癌的治疗效果，和抗EpCAM/CD3的三功能抗体对卵巢癌的治疗效果在文献中[12-14]被记载。

据称显示具有治疗胰腺癌，结肠直肠癌及卵巢癌的抗EpCAM/CD3双特异性抗体也已分别发表在研究文献[15-18]中。此外，中国专利申请CN1812999A也报道了包含抗EpCAM×CD3的双特异性单链抗体构建物的药物，其被预期用于治疗，缓解和/或预防上皮癌或微量残留癌。

但目前尚未发现显示具有期待的和理想的肝癌治疗效果的EpCAM抗体被报道。因此，本领域还需要研制具有优良特性包括但不限于有效针对和治疗肝癌的抗EpCAM抗体，从而开发出肿瘤免疫治疗效果更显著的针对性药物。

发明内容

本发明提供具有EpCAM特异性结合功能域的双特异性抗体分子，该分子同时还具有通过与CD3分子的结合引发T细胞靶向细胞毒作用来杀伤肿瘤细胞。本发明的双特异性抗体显示了优良的针对多种肝癌肿瘤细胞系和对瘤小鼠体内肿瘤的特异性杀伤，特别是针对肝癌细胞的特异性杀伤作用。

本发明涉及一种双特异性抗体，其包含(1)特异性结合EpCAM的第一功能域(2)特异性结合CD3的第二功能域以及(3)连接所述第一和第二功能域的接头，所述第一功能域包含至少一个轻链可变区和至少一个重链可变区，所述轻链可变区包含如下的三个互补决定区：

CDR-L1：RASQDISNYLN(SEQ ID NO：7)

CDR-L2：YTSRLHS(SEQ ID NO：8)

CDR-L3：QQGSTLPYT(SEQ ID NO：9)

所述重链可变区包含如下三个互补决定区：

CDR-H1：GYTFTYYGMN(SEQ ID NO：10)

CDR-H2：WINTYTGEPTYGDDFKG(SEQ ID NO：11)

CDR-H3：TGRATSFDY(SEQ ID NO：12)。

“功能域”指的是能够特异性识别和/或结合到表位上的三维结构，例如抗体或抗体片段，包括天然完整抗体，单链抗体(scFV)，Fd片段，Fab片段，F(ab’)₂片段，单结构域抗体片段，分离的CDR片段，及其衍生物。此处“单链”意思是第一和第二功能域共价连接，优选地以一个核酸分子可编码的共线性氨基酸序列行形成。

优选地或备选地，上述本发明的双特异性抗体中的第一和/或第二功能域选自单克隆抗体，完整抗体，单链抗体(scFV)，Fab片段，Fd片段，Fv片段，F(ab’)2片段和其功能性衍生物。值得注意的是，本发明的功能域的结合位点可以不仅来自于抗体，也可以来自其他与EpCAM和/或CD3结合的蛋白质，例如天然存在的表面受体或配体。

“完整抗体”由两个同样的重链和轻链组成，各条链分别包含一个可变区(V区)和一个或多个恒定区(C区)。可变区负责与抗原结合，而恒定区主要负责结合 效应分子。在各可变区有三个具有高度多样性的柔性的环，称作互补决定区(CDR)，其主要负责识别抗原。可变区的其他部分包含刚性的β片层并支持所谓的框架区(FRs)。CDR和FR间隔排列形成三明治结构。