[发明专利]高效液相质谱联用测定血浆中利多卡因的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物检测方法，具体来说是一种血浆中利多卡因浓度的测定方法。

背景技术

利多卡因是目前临床应用最广泛的局部麻醉药，检测血浆中利多卡因浓度是控制安全用药的保障。

目前，对血浆中利多卡因浓度检测方法的研究，主要有气相色谱法、液相色谱法。高效液相质谱联用即高效液相色谱和质谱联用技术是以液相色谱作为分离系统，以质谱作为检测系统得到质谱图的检测方法。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，结合了色谱对复杂样品的高分离能力和质谱的高选择性，高灵敏度及能够提供相对分子量和结构信息的优点，在药物分析中得到广泛的应用。然而，目前高效液相质谱联用方法测定血浆中利多卡因浓度的研究还很少。“向瑾等在“HPLC-MS/MS测定人体血浆中利多卡因及其代谢物浓度”(《四川大学学报》医学版，2010年第4期)一文中，采用API3000型HPLC-MS/MS液质联用系统，Ultimate C18分析柱(50×4.6mm，5μm)，甲氧苄啶作为内标，流动相为甲醇∶5mmol/L醋酸铵＝50∶50(甲酸调pH5.0)，流速0.2mL/min。样品在碱性条件下用乙酸乙酯提取浓集后进样，选择性离子监测模式检测，结果利多卡因的线性范围为15.625～2000ng/mL，即其可检测的利多卡因低限值为15.625ng/mL。然而，在实际临床中需要检测血浆中浓度更低的利多卡因时，该方法则无能为力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够适用于血浆中更低利多卡因浓度检测的液相色谱质谱子联用检测方法，以解决在较低浓度时高效液相质谱联用方法不能准确检测的问题。

本发明的技术方案为：高效液相质谱联用测定血浆中利多卡因的方法，其过程为：

(1)血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以利多卡因-d₃为内标，用氨水调节pH值到10.0±0.2；

(2)血浆样品中加入正己烷和甲基叔丁基醚，涡旋混合，离心，冷冻；

(3)经过冷冻后含利多卡因及其内标的有机相用液氮吹干，残留物用水、乙腈和甲酸混合液复溶；

(4)复溶样品采用反相高效液相色谱进行分析，色谱柱用POLAR-RP柱，流动相A为甲酸水溶液，流动相B为甲酸的乙腈溶液；流动相被加热的氮气在Z-喷雾源/接口雾化，离子化的化合物经串联四极杆质谱检测。

所述正己烷和甲基叔丁基醚的体积比可以为1∶3。

所述水和乙腈和甲酸混合液可以为水∶乙腈∶甲酸体积比为90∶10∶0.025的混合液。

所述流动相A可以为甲酸体积浓度为0.1％甲酸水溶液。

所述流动相B可以为甲酸体积浓度为0.1％的甲酸乙腈溶液。

本发明的方法，利多卡因测量范围为0.200～100ng/mL，其日间精密度为2.88％～5.74％CV，日间准确度-0.307％～-5.05％DEV，日内精密度为1.33％～9.70％，日内准确度为-0.156％～-7.17％，比现有的液相色谱-质谱联用测定血浆中利多卡因的低限值低的多，可以适用于血浆中较低浓度利多卡因的检测。

附图说明

图1为利多卡因浓度和峰高比值(利多卡因/利多卡因-d₃)关系曲线；

图2为流动相A为0.1％甲酸水溶液时利多卡因的质谱图；

图3为流动相A为0.1％甲酸水溶液时利多卡因-d₃的质谱图；

图4为流动相A为0.5％甲酸水溶液时利多卡因的质谱图；

图5为流动相A为0.5％甲酸水溶液时利多卡因-d₃的质谱图；

图6为流动相A为1.0％甲酸水溶液时利多卡因的质谱图；

图7为流动相A为1.0％甲酸水溶液时利多卡因-d₃的质谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。在下面的实施例中，是以狗血浆作为空白基质。

实验材料

1.1试剂

乙腈

氨水，28-30％(v％)

甲酸

正己烷

甲醇

甲基叔丁基醚

2，4-乙酰基丙酮

水

1.2器材

玻璃烧杯

刻度量桶

20ml聚丙烯液闪瓶

玻璃试管，16×100mm，13×100mm

聚丙烯液试管2ml，20ml