[发明专利]一种核苷酸和/或寡核苷酸及其制备方法有效

申请号：	201310018205.8	申请日：	2013-01-18
公开（公告）号：	CN103936805A	公开（公告）日：	2014-07-23
发明（设计）人：	席真;黄金宇;陆威	申请（专利权）人：	昆山市工业技术研究院小核酸生物技术研究所有限责任公司
主分类号：	C07H19/10	分类号：	C07H19/10;C07H21/02;C07H1/00
代理公司：	北京润平知识产权代理有限公司 11283	代理人：	王凤桐;周建秋
地址：	215347 江苏省苏***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	一种核苷酸寡核苷酸及其制备方法
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【说明书】：

技术领域

本发明涉及化学生物学领域，具体地，涉及一种核苷酸和/或寡核苷酸，以及该核苷酸和/或寡核苷酸的制备方法。

背景技术

化学合成寡核苷酸是指通过促使核苷酸单体间形成5’-3’磷酸二酯键，从而将多个核苷酸单元连接为寡核苷酸链的过程，其中涉及保护的核苷酸的合成。

合成寡核酸的方法有固相合成法和液相合成法，固相合成法通常使用亚磷酰胺缩合反应方式，液相合成法通常使用磷酸三酯缩合反应方式或者氢膦酸酯缩合反应方式。相比于固相合成法，液相合成具有中间体易鉴定，反应规模易方达的特点。因此，液相合成法更适用于规模制备寡核酸，这在合成生产医药用途的寡核酸上具有重要意义。

氢膦酸法合成寡核酸是一种高效的缩合方式，但是在应用液相氢膦酸法合成RNA的时候，缺少一种好的保护基用于保护核苷3’端，在文献中所报道的例如用乙酰丙酰基保护核苷3’端的方法只适用于合成DNA，当应用于合成RNA时，乙酰丙酰基的脱除条件会导致核糖核苷2’位保护基（如TBDMS）发生2’→3’的迁移反应，导致产率降低和产生副产物。

发明内容

本发明的目的是提供一种液相氢膦酸法合成RNA的方法，克服了目前的固相寡核苷酸合成方法的合成规模小、成本高等缺点，提供一种能够大规模合成寡核苷酸的方法。

本发明中设计了一种硼烷基掩蔽的氢膦酸三酯核苷酸，可以应用于液相氢膦酸法合成RNA中，这种硼烷基氢膦酸三酯核苷可经过脱保护直接得到氢膦酸单酯核苷，并应于缩合反应中，不会引起2’位保护基发生2’→3’的迁移反应。本发明可应用于液相法规模制备RNA。

本发明提供了一种式（1）所示的核苷酸和/或寡核苷酸：

式（1）

其中，R为氢或R₁，R₁表示三苯甲基或单甲氧基三苯甲基；

R₂和R₇各自独立地为具有位阻型硅烷结构的基团；

m为0-100的整数，n为0或1；

R₃和R₈各自独立地为环外氨基被酰基保护的鸟嘌呤基、环外氨基被酰基保护的腺嘌呤基、环外氨基被酰基保护的胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基，且各个重复单元中的R₃相同或不同；

R₄为或-S-CH₂CH₂CN；R₄’为氢或R₄；

R₅和R₆各自独立地为-CH₂CH₂CN或R₉为-CH₃、卤素原子、-NO₂或-OCH₃。

本发明提供的式（1）的物质中，当R为H时，式（1）与如下所述的x大于等于1时的式（2）等价；当R为R₁时，式（1）与如下所述的式（4）等价。