[发明专利]一种基于还原氧化石墨烯-纳米金复合材料的金黄色葡萄球菌无标记电化学适配体传感器

权利要求书

1.基于还原氧化石墨烯-纳米金复合材料的适配体传感器用于金黄色葡萄球菌的无标电化学检测，其特征在于；对裸玻碳电极抛光处理，将固定有巯基化的ssDNA的氧化石墨烯滴涂在电极表面，用电化学的方法将氧化石墨烯还原，然后在其表面电沉积一层纳米金，纳米金与DNA巯基端依靠Au-S键稳固结合。再用层层自组装的方法引入巯基化的金黄色葡萄球菌全菌捕获探针，通过Au-S键固定在纳米金表面，制成适配体传感器对金黄色葡萄球菌标准品进行检测，并建立标准曲线，以实现对含金黄色葡萄球菌样品的定量检测。

2.如权利要求1所述的基于还原氧化石墨烯-纳米金复合材料的适配体传感器的制备，其特征在于电极的修饰：

1)取10μL的ssDNA溶于1mL的1mg/mL氧化石墨烯中，超声30min，用移液枪吸取5μL混合液滴涂在电极表面，置于37℃下自然晾干；

2)在电化学工作站中，在0.1mol/L的KH₂PO₄溶液中用循环伏安的方法，将氧化石墨烯还原为还原氧化石墨烯。工作条件如下：工作电压为-0.2～1.0V，扫速100mv/s，圈数为20圈；

3)在电化学工作站中，用计时电流的方法，在1％的氯金酸中恒电位沉积。工作条件如下：工作电压为-200mv，工作时间为20s；

4)电极晾干后，用移液枪吸取5μL的巯基化金黄色葡萄球菌适配体滴涂在电极表面，置于37℃下自然晾干，得到固定有金黄色葡萄球菌全菌捕获探针的电极；

5)在浓度0.1mol/L的2-巯基乙醇封闭1.5小时，以消除非特异性吸附，至此工作电极制备完成。

3.基于还原氧化石墨烯-纳米金复合材料的适配体传感器的使用，在37℃恒温下，将工作电极在金黄色葡萄球菌溶液中的孵育30min。然后在三电极体系中，利用电化学阻抗法进行测量。工作条件如下：电解液为含0.1mol/LKCl的5mmol/LK₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆](1∶1)，PH＝7.4，外加电压为0.24V，频率范围为10⁵～10^-1HZ，振幅为5mV。