[发明专利]一种检测过敏原牛奶的试剂盒和引物有效
| 申请号： | 201310016675.0 | 申请日： | 2013-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN103103265A | 公开（公告）日： | 2013-05-15 |
| 发明（设计）人： | 曾静;程晋霞;张蕾 | 申请（专利权）人： | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 赵晓丹 |
| 地址： | 100026*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 过敏原 牛奶 试剂盒 引物 | ||
1.一组检测过敏原牛奶的引物，其特征在于，由序列表SEQ ID No.1至序列表SEQ ID No.5所示碱基序列的寡核苷酸组成；其中SEQ ID No.1为外侧上游引物，SEQID No.2为外侧下游引物，SEQ ID No.3为内侧上游引物，SEQ ID No.4为内侧下游引物，SEQ ID No.5为环状下游引物。
2.一种检测过敏原牛奶的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下试剂：
（1）LAMP反应液，其包括：ThermoPol缓冲液、甜菜碱、dNTPs、MgSO4和检测引物；
（2）Bst DNA聚合酶；
（3）DEPC水；
（4）阴性对照；
（5）阳性对照；
（6）显色液：SYBR Green I染料。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测引物为序列表SEQ ID No.1所示的外侧上游引物，序列表SEQ ID No.2所示的外侧下游引物，序列表SEQ ID No.3所示的内侧上游引物，序列表SEQ ID No.4所示的内侧下游引物，序列表SEQ ID No.5所示的环状下游引物。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应液中各种成分的使用终浓度为1×ThermoPol缓冲液、0.8M甜菜碱、1.4mM dNTPs、4.0mM MgSO4、0.2μM外侧上游引物、0.2μM外侧下游引物、1.6μM内侧上游引物、1.6μM内侧下游引物、0.8μM环状下游引物。
5.一种检测过敏原牛奶的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1）提取样品的DNA；
2）进行LAMP反应；反应条件为63℃恒温反应60min，85℃2min使酶失活，反应结束；
3）通过反应体系颜色变化和/或电泳检测进行结果判定；
其中，进行LAMP反应时，使用的引物为序列表SEQ ID No.1所示的外侧上游引物，序列表SEQ ID No.2所示的外侧下游引物，序列表SEQ ID No.3所示的内侧上游引物，序列表SEQ ID No.4所示的内侧下游引物，序列表SEQ ID No.5所示的环状下游引物。
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