[发明专利]非洲爪蛙增殖诱导配体TNFSF13基因和蛋白质制备及应用

权利要求书

1.非洲爪蟾增值诱导配体cDNA，其特征在于其序列如SEQID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述的洲爪蟾增值诱导配体cDNA的克隆方法，其步骤如下：

（1）提取非洲爪蟾脾脏总RNA，逆转录为cDNA第一链；

（2）设计引物扩增该基因的中间片段：

正义寡核苷酸引物：Xl-F：5’- CTCTGGGGGGGTACAGGA -3’

反义寡核苷酸引物：Xl-R：5’- TTAAAGCCTGACAAGACCAAG-3’

（3）根据所得到的中间片段，设计引物扩增该基因的3’末端序列：

3’端正义寡核苷酸外引物：GSP-3F1’： 5’-TTCACGATGGGACACTTGATAACACGT -3’ 

3’端正义寡核苷酸内引物：GSP-3F2’： 5’-AGAGCWTGGCGTATAACACCTGTTACA -3’ 

3’端反义寡核苷酸外引物：

UPM ：5’-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’

3’端反义寡核苷酸内引物：

NUP：5’-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’

（4）根据所得到的中间片段，设计引物扩增该基因的5’末端序列：

5’端正义寡核苷酸外引物：UPM 5’-CTAATACGACTCACTATAGGG CAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’

5’端正义寡核苷酸内引物：NUP：5’-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’

5’端反义寡核苷酸外引物：GSP-5R1’： 5’- GATCAGGCACCAGGTGAACATA-3’

5’端反义寡核苷酸内引物：GSP-5R2’: 5’- AGGTTGCCAATGTGGATTGACTGGCACAT-3’ 

(5) 将上述引物的PCR扩增产物，克隆入PMD19-T载体，并进行测序碱基序列测定，经软件拼接得到了非洲爪蟾增值诱导配体基因的全长cDNA序列。

3.一种重组表达载体sumo-XsAPRIL的构建方法，其特征在于是根据权利要求1所述非洲爪蟾增值诱导配体cDNA序列设计带有酶切位点的引物Xs-F和Xs-R，进行PCR扩增，得到如SEQ ID NO.4所示的非洲爪蟾APRIL基因胞外可溶区，将PCR产物割胶回收，回收产物用XhoI酶切, SUMO 载体用StuI和XhoI 双酶切；T4 DNA Ligase连接酶切后的载体和PCR产物，得到sumo-XsAPRIL重组表达质粒；所述引物Xs-F和Xs-R序列分别如SEQ ID NO.18 和SEQ ID NO.19所示。

4.一种权利要求1所述的非洲爪蟾增值诱导配体cDNA的重组应用，是通过现有基因工程方法，生产重组非洲爪蟾增值诱导配体蛋白，作为免疫增强剂。