[发明专利]利用高通量组织芯片检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达的方法无效
| 申请号： | 201310013304.7 | 申请日： | 2013-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN103103263A | 公开（公告）日： | 2013-05-15 |
| 发明（设计）人： | 陈菊祥;周劲旭;徐涛;卢亦成;严勇;秦荣;王洪祥 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 通量 组织 芯片 检测 golph3 胶质 中的 表达 方法 | ||
1.一种利用高通量组织芯片检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达的方法，包括：
（1）首先构建人胶质瘤细胞的组织芯片，然后进行免疫组化染色；
（2）培养人胶质瘤细胞；
（3）在GOLPH3的cDNA序列中采用下列两条候选序列对GOLPH3进行siRNA的敲减：
5’-CAGCGCCTCATCAAGAAA-3’和5’-GCCAACACCAATGAGGTT-3’；
（4）使用Trizol试剂进行总细胞RNA的分离，采用工具箱合成第一股cDNA链，进行实时PCR扩增；
（5）检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达并分析数据。
2.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（3）中设计了一个shRNA序列，同时包含siRNA序列的正链和反链，采用一个环形序列来分离互补域。
3.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的工具箱为ReverTra Ace qPCR RT工具箱。
4.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的扩增为在ABI PRISM7900HT序列监测系统中进行。
5.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测GOLPH3在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的扩增条件为先在95°下进行3分钟，随后95°下10秒、55°下45秒重复循环40次。
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