[发明专利]含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA其制备方法及用途

权利要求书

1.含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA，其特征在于该GLS特异性siRNA的反义链和正义链序列5’端均为鸟嘌呤核苷，该鸟嘌呤核苷的戊糖5’位点上修饰有一个自由三磷酸基团。

2.根据权利要求1所述的含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA，其特征在于所述的GLS特异性siRNA序列选自：ppp-GLS1，其正义链序列如SEQ ID NO.1所示，反义链序列如SEQ ID NO.2所示；ppp-GLS2，其正义链序列如SEQ ID NO.3所示，反义链序列如SEQ ID NO.4所示； ppp-GLS3，其正义链序列如SEQ ID NO.5所示，反义链序列如SEQ ID NO.6所示；或ppp-GLS4，其正义链序列如SEQ ID NO.7所示，反义链序列如SEQ ID NO.8所示。

3.权利要求1或2所述的含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

4.权利要求3的用途，其中所述肿瘤选自胰腺癌、神经胶质细胞瘤、肺癌和肝癌。

5.治疗肿瘤的药物组合物，其包含权利要求1或2所述的含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA。

6.权利要求5的药物组合物，其用于治疗选自胰腺癌、神经胶质细胞瘤、肺癌和肝癌的肿瘤。

7.含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA的制备方法，其包括以下步骤：

（1）、siRNA的设计与筛选：依据GLS基因编码序列，设计多条与之匹配的反义序列，合成后转染细胞检测，根据GLS的抑制效果筛选序列；

（2）、模板合成：根据步骤（1）中筛选出siRNA的cDNA序列，在其3’端依次链接一个胞嘧啶核苷和一段T7RNA聚合酶启动子序列，作为DNA模板，合成；利用DNA多聚酶合成模板双链；

（3）、体外转录：利用T7RNA聚合酶启动体外转录并在新合成的RNA 5’端加上三磷酸基团；将合成的正义链和反义链混合，置于37℃过夜，杂交形成稳定双链；

（4）、提纯检测：提取、纯化步骤（3）获得的RNA稳定双链。

8.权利要求7的制备方法，其中步骤（2）中得到的DNA模板序列选自：ppp-GLS1 DNA模板，其正义链序列如SEQ ID NO.11所示，反义链序列如SEQ ID NO.12所示；ppp-GLS2 DNA模板，其正义链序列如SEQ ID NO.13所示，反义链序列如SEQ ID NO.14所示； ppp-GLS3 DNA模板，其正义链序列如SEQ ID NO.15所示，反义链序列如SEQ ID NO.16所示；或ppp-GLS4 DNA模板，其正义链序列如SEQ ID NO.17所示，反义链序列如SEQ ID NO.18所示。

9.权利要求7或8的制备方法，其中通过所述方法获得的含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA序列选自：ppp-GLS1，其正义链序列如SEQ ID NO.1所示，反义链序列如SEQ ID NO.2所示；ppp-GLS2，其正义链序列如SEQ ID NO.3所示，反义链序列如SEQ ID NO.4所示； ppp-GLS3，其正义链序列如SEQ ID NO.5所示，反义链序列如SEQ ID NO.6所示；或ppp-GLS4，其正义链序列如SEQ ID NO.7所示，反义链序列如SEQ ID NO.8所示。