[发明专利]一种分子标记的白鹤芋(白掌)定向选育方法

权利要求书

1.一种分子标记的白鹤芋(白掌)定向选育方法，其特征在于：在白鹤芋(白掌)杂交育种的过程中引入了分子标记，且此分子标记所标记的为与白鹤芋(白掌)优良性状相关的基因或基因簇，特别是与色泽表型密切相关的基因或基因簇；此等所被标记的基因或基因簇包括但不限于花青素合成途径的关键酶基因，如苯丙氨酸裂解酶(PAL)基因、二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因、花青素合成酶(ANS)基因及类黄酮3-葡糖基转移酶(3GT)基因；此等所被标记的基因或基因簇包括但不限于花青素合成途径中的3个转录因子基因，如R2R3-MYB蛋白基因、myc家族的bHLH蛋白基因及WD40蛋白基因。

2.根据权利1所述的选育方法，其特征在于分子标记的白鹤芋(白掌)定向选育方法包括如下程序：

(1)分子标记的选择及检测：所选择的分子标记为与白鹤芋(白掌)优良性状相关的基因或基因簇的保守区域，或是包含有与白鹤芋(白掌)优良性状相关的基因或基因簇的活性关键位点的区域，并依据上述区域分别设计一对PCR引物，用PCR方法进行检测；

(2)亲本选择：选择能检测到目标分子标记的白鹤芋(白掌)作为亲本；

(3)杂交：将选择的亲本通过人工授粉方式进行杂交，收集杂交所得到的种子播种萌发后得杂交后子代；

(4)杂交子代分子标记检测与子代优选：抽提杂交子代不同生长发育阶段其叶片组织中的总DNA及总RNA，以此为模板，用所设计的PCR引物，分别进行PCR检测及逆转录PCR检测，考察子代中所标记的基因或基因簇的量与不同生长发育阶段的转录量的稳定性，以此为依据，优选出杂交子代；

(5)优选子代组织培养扩繁：将优选出的杂交子代通过组织培养的方式进行无性扩繁，得到优选子代的组培苗；

(6)优选子代组培苗培育与淘选：将优选子代组培苗进行壮苗培育，培育过程中分阶段检测所标记的基因或基因簇的量与转录量，考察其稳定性，淘汰稳定性量较差的子代，得到适合用于通过组织培养方式进行无性扩繁育苗的杂交子代；

(7)选育子代的新品种性状验证：对(6)中所得到的优选杂交子代及其无性扩繁得到的组培苗进行新品种性状验证试验，选取能通过新品种验证试验的选育子代，得到白鹤芋(白掌)新品种。

3.根据权利1与权利2所述的选育方法，其特征在于：所用分子标记为与白鹤芋(白掌)优良性状相关的基因或基因簇的任意组合(如单个基因、两两组合、三三组合等)；所用分子标记分别为所选定标记基因组合中各个基因的保守区域；所用的分子标记检测PCR引物分别 依据所选定标记基因组合中各个基因的保守区域设计。

4.根据权利1与权利2所述的选育方法，其特征在于：所用分子标记为花青素合成途径中的4个关键酶基因(苯丙氨酸裂解酶(PAL)基因、二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因、花青素合成酶(ANS)基因及类黄酮3-葡糖基转移酶(3GT)基因)与花青素合成途径中的3个转录因子基因(R2R3-MYB蛋白基因、myc家族的bHLH蛋白基因、WD40蛋白基因)共7个基因中的任意组合(如单个基因、两两组合、三三组合等)；所用分子标记分别为所选定标记基因组合中各个基因的保守区域；所用的分子标记检测PCR引物分别依据所选定标记基因组合中各个基因的保守区域设计。

5.根据权利1与权利2所述的选育方法，其特征在于：所标记为苯丙氨酸裂解酶(PAL)基因及二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因等2个基因组合；所用分子标记分别为苯丙氨酸裂解酶(PAL)基因、二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因的保守区域；所用的分子标记检测PCR引物分别依据苯丙氨酸裂解酶(PAL)基因、二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因的保守区域设计。

6.根据权利1与权利2所述的选育方法，其特征在于：所标记为二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因、花青素合成酶(ANS)基因及类黄酮3-葡糖基转移酶(3GT)基因等3个基因组合；所用分子标记分别为二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因、花青素合成酶(ANS)基因及类黄酮3-葡糖基转移酶(3GT)基因的保守区域；所用的分子标记检测PCR引物分别依据二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因、花青素合成酶(ANS)基因、类黄酮3-葡糖基转移酶(3GT)基因的保守区域设计。