[发明专利]一种荧光标记的氨基糖苷类腺苷修饰酶及其检测抗生素的方法

权利要求书

1.一种荧光标记的氨基糖苷类腺苷修饰酶，其特征在于：在氨基糖苷类腺苷修饰酶的自由巯基Cys198上，标记有含有或修饰巯基的荧光基团。

2.根据权利要求1所述一种荧光标记的氨基糖苷类腺苷修饰酶，其特征在于：所述标记含有或者修饰巯基的荧光基团为荧光素-5-马来酰亚胺。

3.一种荧光标记的氨基糖苷类修饰酶检测抗生素的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

（1）将含有或者修饰巯基的荧光基团标记在氨基糖苷类腺苷修饰酶的自由巯基Cys198上；

（2）制备反应体系：将步骤（1）制得的标记有荧光基团的氨基糖苷类腺苷修饰酶与ATP溶液和二价金属离子溶液配置成混合溶液，混合溶液为中性，30⁰C水浴，备用；

（3）将一系列不同浓度的已知氨基糖苷类抗生素样品分别加入步骤（2）制得的反应体系，根据产生的荧光信号强度不同，制定抗生素浓度和荧光强度的标准曲线；

（4）将含有氨基糖苷类抗生素的待测样本溶液加入步骤（2）制得的反应体系中，记录荧光信号的变化；

（5）将步骤（4）得到的荧光信号和步骤（3）得到的标准曲线对比，判断待测样品中氨基糖苷类抗生素的残留以及定量分析。

4.根据权利要求3所述一种荧光标记的氨基糖苷类腺苷修饰酶，其特征在于：步骤（1）中所述含有或者修饰巯基的荧光基团为荧光素-5-马来酰亚胺。

5.根据权利要求3所述的一种荧光标记的氨基糖苷类修饰酶检测抗生素靶标分子的方法，其特征在于：混合溶液中标记荧光基团的氨基糖苷类腺苷修饰酶的浓度为0.1-10μM 二价金属离子的浓度为7.5mM，ATP的浓度为2.5mM。

6.根据权利要求3所述的一种荧光标记的氨基糖苷类修饰酶检测抗生素靶标分子的方法，其特征在于：步骤（4）中待测样本溶液中的含有氨基糖苷类抗生素的浓度为1 μM -1mM。

7.根据权利要求3所述的一种荧光标记的氨基糖苷类修饰酶检测抗生素的方法，其特征在于：所述二价金属离子为Mg²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺或Mn²⁺。

8.根据权利要求3所述的一种荧光标记的氨基糖苷类修饰酶检测抗生素的方法，其特征在于：在步骤（3）中，抗生素浓度与荧光强度的标准曲线建立：

式中：为待测样品中残留的氨基糖苷类抗生素的浓度；为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，抗生素的最大浓度；为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，抗生素的最小浓度；为含有氨基糖苷类抗生素的待测样品的荧光强度；为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，荧光信号的最大值；为在标准品测试中，荧光信号随抗生素浓度增大的线性区，荧光信号的最小值。