[发明专利]一种球兰组织培养用培养基及培养方法

权利要求书

1.一种球兰组织培养用培养基，其特征在于，包含用下述原料配制成的各种培养基：

外植体诱导培养基，包括琼脂6～10g·L^-1，基本培养基MS，激动素KT 0.5～1.0mg·L^-1，6-苄基嘌呤6-BA 0.5～1.0mg·L^-1，和萘乙酸NAA 0.5～1.0mg·L^-1；

增殖继代培养基，包括琼脂6～10g·L^-1，基本培养基MS，6-苄基嘌呤6-BA1.5～2.0mg·L^-1，萘乙酸NAA 0.2mg·L^-1，赤霉素GA 0.5～0.8mg·L^-1，和硝酸铈Ce(NO₃)₃ 0.20～0.30mg·L^-1；

芽分化培养基，包括琼脂6～10g·L^-1，基本培养基MS，激动素KT 0.5～1.0mg·L^-1，萘乙酸NAA 0.5mg·L^-1，赤霉素GA 1.0mg·L^-1，硝酸镧La(NO₃)₃ 0.15～0.20mg·L^-1，和硝酸铈Ce(NO₃)₃ 0.20～0.30mg·L^-1；

生根培养基，包括琼脂6～10g·L^-1，基本培养基White，赤霉素GA0.5～1.0mg·L^-1，氯化镧LaCl₃ 10～20mg·L^-1；

生根浸泡液，包括萘乙酸NAA 0.2～1.0mg·L^-1，赤霉素GA 0.5mg·L^-1，硝酸铈Ce(NO₃)₃ 0.15～0.25mg·L^-1，和氯化镧LaCl₃ 15～30mg·L^-1。

2.一种球兰组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、外植体选取：选择长势较好、无病虫害的若干成熟叶片作为外植体；

b、外植体消毒灭菌：将外植体的叶片用洗衣粉溶液洗涤，再用清水冲洗10～20分钟；在超净工作台上，用体积分数为65～75％乙醇溶液浸泡5～15s，无菌水冲洗1～3次，再置于升汞溶液中浸泡10～15min，最后用无菌水冲洗4～5次，滤干水分；再将经表面灭菌的叶片切成0.5～2.5cm²的小块，待接种。

c、组织培养：将步骤b制得的外植体在超净工作台上接种于外植体诱导培养基上，培养30～50天后，将形成的愈伤组织进行分切，分别转接于增殖继代培养基上进行培养；愈伤组织进行增殖继代培养后，再将其转接于芽分化培养基上进行丛生芽和芽点的促生培养；当芽生长为2～3cm高的壮苗时，放入生根浸泡液中浸泡20～30min，再将浸泡后的壮苗取出，将壮苗表面的液体吸干并转入White培养基中，6-8天后取出，转入生根培养基中进行生根培养；

d、移栽：将进行生根培养后的球兰组培苗进行炼苗后移栽。