[发明专利]肾癌血液生物标志物(Biomarker)的检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种肾癌血液生物标志物的检测方法及试剂盒。

背景技术

肾脏在身体中扮演着过滤装置的角色，能够从血液中去除废物、多余水分及盐分。肾癌通常表示发生在肾脏的实质部(肾脏中制造尿的细胞集聚而成的部分，其由髓质与皮质构成)的肾细胞癌(renal cell carcinoma)。典型地，肾细胞癌通常以发生在一侧肾脏的单一肿瘤为典型例，但有时候也会侵犯到两侧肾脏。

肾细胞癌可以分类为透明细胞型肾细胞癌(clear cell RCC)、乳头状肾细胞癌(papillary RCC)、嫌色性肾细胞癌(chromophobe RCC)、髓质性肾细胞癌(medullary RCC)、未分类肾细胞癌(unclassified RCC)、肾盂移行细胞癌(kidney transitional cell carcinoma,TCC)、肾嗜酸细胞癌(ranal oncocytoma)等，其中，透明细胞型肾细胞癌占66～75％，乳头状肾细胞癌占15％左右，嫌色性肾细胞癌占5％左右。

肾细胞癌可以根据Roboson分期体系如下分类，局限于实质部内的肿瘤称为第一期，浸润到肾皮膜外或者局限于肾筋膜内的肿瘤称为第二期，转移到肾脏周围血管或淋巴结时称为第三期，侵犯到肾脏周围的其它脏器或者发生远距转移时称为第四期。第一期还根据肿瘤大小而如下区分，肿瘤大小低于4cm时称为Ia，4cm以上时称为Ib，第三期则对侵犯到肾静脉或下腔静脉等肾脏周围血管者称为Ⅲ/a期，如果转移到肾脏周围淋巴结则称为Ⅲ/a期。

肾癌主要发生在60～70岁的老年层并且呈现出持续增加的趋势，在韩国的男性癌症病人中以2.0％占据第10位，在韩国女性癌症病人中以1.2％占据第15位。肾癌在肿瘤大小较小时几乎没有任何症状，肿瘤生长到一定大小而成为推挤脏器的程度时才会出现症状。最常见的症状是血尿，但也仅呈现在60％左右的患者。因此，常常出现诊断过迟的情形而在第一次诊断出来时大约有30％的患者已经处于转移状态，并且根据转移的部分而出现呼吸困难、咳嗽、头痛之类的症状。

大多数情况下，诊断肾癌时利用X-ray、CT摄影、超声波及组织分析之类的方法。这些方法难以区分各种形式的肾癌，需时较长，劳动力的投入较多。

本发明的技术方案则把能够适用于肾癌早期诊断及非侵入性诊断的3种肾癌血液生物标志物NNMT(Nicotinamide N-methyltransferase)、LCP1(L-Plastin)及NM23A(Non-metastatic cells 1protein)加以组合·利用而得以提高肾癌诊断能力。

解决的技术课题

本发明的目的是提供一种肾癌血液生物标志物的检测方法。

本发明的另一个目的是提供一种肾癌血液生物标志物的检测试剂盒(kit)。

本发明的其它目的或具体目的将在后述说明中得到阐述。

解决课题的技术方案

本发明提供一种肾癌血液生物标志物的检测方法。

本发明人利用取自肾癌患者100人与正常人90人的共190个血液试剂进行了预备实验并且得知患者群的NNMT、LCP1及NM23A的血中浓度高于正常人群，从而得以确认这些蛋白质具有作为肾癌血液生物标志物的可能性，把上述3种肾癌血液生物标志物组合后通过ROC(Receiver Operating Characteristic)曲线分析法对肾癌诊断能力进行评估时，发现这些标志物的诊断能力得到了提升。具体地说，3种血液生物标志物中诊断能力最强的NNMT(在NNMT、LCP1及NM23A等3种标志物中NNMT的诊断能力最高，请参考下列实施例)的准确度(AUC)为0.927，特异度为95％时灵敏度为69％，但是把3种血液生物标志物组合后适用逐步逻辑回归分析法(stepwise logistic regression analysis)时，准确度为0.9333，特异度为95％时灵敏度为77％，适用下列实施例中的计分法(scoring method)时，AUC为0.948，特异度为95％时灵敏度为89％。

更进一步，以使用该190个血液试剂的预备实验的结果为基础，本发明人根据基于上述计分法的上述3种肾癌血液生物标志物的组合对30个正常人血液试剂与29个患者血液试剂实际进行盲试(blind test)实验并且在其结果发现能够把正常人30人中的29人识别成正常人而能够把患者29人中的28人识别成患者(亦即，灵敏度96.67％＝29/30×100(％)、特异度96.55％＝28/29×100(％))。