[发明专利]利用免疫球蛋白片段的位点特异性GLP-2缀合物

说明书

技术领域

本发明涉及胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)缀合物，其中在其C-末端具有引入的巯基基团的GLP-2或其衍生物通过非肽基聚合物共价连接至免疫球蛋白Fc片段，其中非肽基聚合物和免疫球蛋白Fc片段位点-特异性地连接至GLP-2或其衍生物的氨基酸残基而不是其N-末端氨基基团；用于制备GLP-2缀合物的方法；包括其的药学组合物；和通过使用其治疗或预防肠道疾病、肠道损伤或胃病的方法。

背景技术

胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)是33个氨基酸的肽激素，其在养分摄取时由肠道内分泌L细胞产生。GPL-2刺激小肠和大肠中的粘膜生长(DG Burrin等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 279(6):G1249-1256，2000)并且抑制肠道细胞和隐窝细胞的细胞凋亡(Bernardo Yusta等，Gastrpenterology 137(3)：986-996，2009)。此外，GLP-2增强小肠中养分的吸收(PALLE BJ等，Gastrpenterology 120：806-815，2001)并且降低肠道通透性(Cameron HL等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 284(6)：G905-12，2003)。另外，GLP-2抑制胃排空和胃酸分泌(Meier JJ等，Gastrpenterology 130(1)：44-54，2006)，同时增加肠道血液流速(Bremholm L等，Scand J Gastroenterol.44(3)：314-9，2009)和松弛肠道平滑肌(Amato A等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.296(3)：G678-84，2009)。

因为GLP-2能够吸收和保持能量并且激活肠道细胞的功能，已经在肠道疾病和损伤的各种体内模型中显示高的治疗潜能。作为调节养分吸收的激素，GLP-2具有很大的希望用于治疗短肠综合症(SBS)的疗法。SBS由先天的原因或后天的原因，比如外科手术去除肠造成，并且导致由于小肠吸收面积下降而引起的营养不足。已经报道GLP-2改善具有SBS的大鼠模型的消化道中养分摄取和吸收(Ljungmann K等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.281(3)：G779-85，2001)。

此外，克罗恩病是慢性炎症肠道疾病，其可在消化道从口至肛门范围的任何区域产生。至今不知道克罗恩病的原因，但是认为是由于身体对消化道中正常存在的细菌细胞过度的炎症反应以及环境和遗传原因引起的。已知GLP-2可防止或减轻当由于化疗或遗传原因发展粘膜炎、结肠炎或炎症肠道疾病时粘膜上皮细胞的伤害(Qiang Xiao等，Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol.278(4)：R1057-R1063，2000)。

化学疗法诱导的腹泻(CID)是限制抗癌剂剂量的因素之一并且是抗癌化学疗法的最常见副作用。大约10％的患者具有晚期癌症。大约80％的具有晚期癌症接受5-FU(5-氟尿嘧啶，Adrucil)/伊立替康(Camptosar)单个/组合疗法的患者经历CID并且他们的大约30％显示3至5级的严重腹泻症状。另外，如果粘膜炎或嗜中性细胞减少症在具有的CID患者中同时发生，有死亡的危险。在CID诱导的大鼠模型中，GLP-2显示减轻由5-FU诱导的肠重量、绒毛高度和隐窝深度减小的影响，从而表明其用于CID治疗的治疗潜能(A.Tavakkolizadeh等，J Surg Res.91(1)：77-82，2000)。

尽管该高的治疗潜能，GLP-2仍具有开发成为商用药物的局限性。肽比如GLP-2可由于低稳定性而容易转化，容易被体内蛋白酶降解并且丧失活性，并且由于它们相对小的尺寸而容易通过肾清除。所以，为了维持肽药物的最佳血液浓度和滴度，需要更频繁施用肽药物。但是，大部分肽药物以各种类型的注射施用，并且需要频繁的注射以维持肽药物的血液浓度，其造成患者的严重疼痛。在这点上，已经进行许多尝试以解决这些问题，其中之一已经开发了增加肽药物的膜通透性的方法，其使得肽药物通过口服或鼻途径递送至身体。但是该方法与其注射相比具有低肽药物递送效率的局限性，并且因此仍难以保持足够的用于治疗用途的肽药物的生物活性。