[发明专利]用于降低重组蛋白的降解的方法和材料

权利要求书

1.一种分离的耶氏酵母(Yarrowia)细胞，其遗传工程化改造为包含pYPS1(YPS1蛋白)活性缺陷和pYPS2(YPS2蛋白)活性缺陷。

2.权利要求1的细胞，其中所述细胞是解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。

3.权利要求1或权利要求2的细胞，其中所述细胞进一步包含编码靶蛋白的核酸。

4.权利要求3的细胞，其中所述靶蛋白是溶酶体蛋白、病原体蛋白、生长因子、细胞因子、趋化因子、抗体或其抗原结合片段的一条或两条多肽链、或融合蛋白。

5.权利要求4的细胞，其中所述抗体选自下组：结合血管内皮生长因子(VEGF)的抗体、结合表皮生长因子受体(EGFR)的抗体、结合CD3的抗体、结合肿瘤坏死因子(TNF)的抗体、结合TNF受体的抗体、结合CD20的抗体、结合糖蛋白IIa/IIb受体的抗体、结合IL2受体的抗体、结合CD52的抗体、结合CD11a的抗体、和结合HER2的抗体。

6.权利要求4的细胞，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab、F(ab’)₂、Fv、和单链Fv(scFv)片段。

7.权利要求1-6中任一项的细胞，其中所述细胞进一步是OCH1活性缺陷的。

8.权利要求1-7中任一项的细胞，其中所述细胞包含编码alpha-1,2甘露糖苷酶的核酸。

9.权利要求8的细胞，其中所述alpha-1,2甘露糖苷酶包含靶向序列以将所述alpha-1,2甘露糖苷酶靶向至胞内区室。

10.权利要求1-9中任一项的细胞，其中所述细胞进一步是ALG3活性缺陷的。

11.权利要求1-10中任一项的细胞，其中所述细胞进一步包含编码alpha-1,3-葡萄糖基转移酶的核酸。

12.权利要求1-11中任一项的细胞，所述细胞进一步包含编码葡糖苷酶的alpha和beta亚基的核酸。

13.权利要求1-12中任一项的细胞，其中所述细胞包含编码GlcNAc-转移酶I的核酸。

14.权利要求13的细胞，其中所述GlcNAc-转移酶I包含靶向序列以将所述GlcNAc-转移酶I靶向至胞内区室。

15.权利要求1-14中任一项的细胞，其中所述细胞包含编码GlcNAc-转移酶II的核酸。

16.权利要求15的细胞，其中所述GlcNAc-转移酶II包含靶向序列以将所述GlcNAc-转移酶II靶向至胞内区室。

17.权利要求1-16中任一项的细胞，所述细胞进一步包含编码半乳糖基转移酶的核酸。

18.权利要求17的细胞，其中所述半乳糖基转移酶包含靶向序列以将所述半乳糖基转移酶靶向至高尔基体。

19.权利要求1-18中任一项的细胞，其中所述细胞不生成可检测水平的功能性pYPS1或功能性pYPS2。

20.权利要求1-19中任一项的细胞，其中所述细胞不生成可检测的编码功能性pYPS1和功能性pYPS2的mRNA分子。

21.权利要求1-20中任一项的细胞，其中所述YPS1和YPS2基因在所述细胞中被破坏。

22.权利要求1-21中任一项的细胞，其中所述YPS1和YPS2可读框被删除。

23.解脂耶氏酵母细胞的基本上纯的培养物，大量的所述解脂耶氏酵母细胞被遗传工程化改造为包含pYPS1活性缺陷和pYPS2活性缺陷。

24.一种分离的耶氏酵母细胞，其遗传工程化改造为包含(i)pYPS1活性缺陷和(ii)pYPS2活性缺陷，以及下列一项或多项：(iii)ALG3活性缺陷，(iv)OCH1活性缺陷，(v)编码alpha-1,2甘露糖苷酶的核酸，(vi)编码GlcNAc-转移酶I的核酸，(vii)编码GlcNAc-转移酶II的核酸，(viii)编码甘露糖苷酶II的核酸，(ix)编码α-1,3-葡萄糖基转移酶的核酸，(x)编码半乳糖基转移酶的核酸，和(xi)编码葡糖苷酶的α和β亚基的核酸。