[发明专利]制备人类原代肝细胞的球体的方法

权利要求书

1.一种培养的人类原代肝细胞的分离的肝细胞球体，其中，所述球体没有任何人造支架材料。

2.根据权利要求1所述的分离的球体，其中，人类α1-抗胰蛋白酶在所述球体的肝细胞中的生成量为在新鲜分离的人类原代肝细胞中所确定的生成量的至少50％。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的分离的球体，其中，人类白蛋白在所述球体的肝细胞中的生成量为在新鲜分离的人类原代肝细胞中所确定的生成量的至少50％。

4.根据权利要求1至2中任一项所述的分离的球体，其中，在相邻肝细胞之间的胆小管存在于所述球体中的至少50％的肝细胞中。

5.根据权利要求1至2中任一项所述的分离的球体，其中，所述球体具有至少50μm的直径。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的球体用于肝脏细胞移植医学中。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的球体用于治疗患者的肝脏疾病的方法中。

8.根据权利要求7所述的分离的球体，其中，所述肝脏疾病选自由甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎，肝硬化，α1-抗胰蛋白酶缺乏症，威尔森氏症，血色沉着病，胆道梗阻，糖原贮积病，幼童中的瑞氏综合症，I型遗传性酪氨酸血症，寄生物感染，原发性硬化性胆管炎，继发性硬化性胆管炎，慢性布加氏综合症，多囊肝脏疾病，草酸过多症，尿素循环障碍，线粒体耗竭综合症，艾欧吉勒综合征，克里格勒-纳贾尔综合症，原发家族性肝内胆汁淤积症，新生儿肝炎，胆道闭锁，暴发性肝功能衰竭，酒精性肝硬化，自身免疫性肝炎，重叠综合症，由对乙酰氨基酚、毒伞素或其它药剂引起的肝中毒所组成的组。

9.根据权利要求8所述的分离的球体，其中，所述球体源自于患者自身的原代肝细胞。

10.一种用于制备人类原代肝细胞的球体的方法，包括以下步骤：

(a)在允许肝细胞球体形成的条件下，在多糖支架上培养分离的人类原代肝细胞；

(b)使所述多糖支架溶解以释放所述肝细胞球体；以及

(c)使所述肝细胞球体与培养基分离。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述多糖支架是藻酸盐支架。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，在步骤(b)中，通过加入柠檬酸或EDTA使所述藻酸盐支架溶解。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中，在步骤(d)中，分离所述肝细胞球体包括过滤和/或离心。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中，所述培养进行7天至14天。

15.一种能通过权利要求10至14中任一项所述的方法得到的人类原代肝细胞的分离的肝细胞球体。

16.权利要求1至9或权利要求15中任一项所述的分离的肝细胞球体在体外肝毒性研究或药物筛选测定中的应用。