[发明专利]编码视杆细胞来源的视锥细胞活力因子的载体

说明书

授权信息

在美国国家健康研究院的健康与公共服务部资助的SBIR Grant号EY016262之下借助政府支持完成本发明。政府可拥有本发明的某些权利。

背景技术

RdCVF是由视网膜内的视杆感光细胞特异性表达的硫氧还蛋白样蛋白(Léveillard等(2004)Nature Genetics36：755-759和增补信息)。在人中发现两种不同的RdCVF基因，它们命名为RdCVF1和RdCVF2。两种RdCVF基因都通过选择性剪接编码两种产物：全长蛋白和C末端转录后截短蛋白，分别称为长RdCVF和短RdCVF。

短RdCVF据描述为用于促进视锥细胞存活的分泌的营养因子，长RdCVF据描述为与胞内蛋白相互作用的具有氧化还原活性的酶(Léveillard等(2010)Sci Transl Med.2(26)：26ps16)。例如，tau据描述为RdCVF-L的结合伴侣，并且tau是只在细胞内的(Fridlich等(2009)Molecular&Cellular Proteomics8(6)：1206-18)。

发现罹患某些视网膜营养不良的个体眼中的RdCVF蛋白水平低于未患有视网膜营养不良的个体(PCT公开WO02/081513)。

已经证明不同形式的RdCVF蛋白可以促进体外和体内的视锥感光细胞存活。例如，短形式的人RdCVF1(RdCVF1S)蛋白的眼内注射不仅挽救视锥细胞免于退化，还在遗传性视网膜退化的动物模型中保护其功能(Yang等(2009)Mol Therapy17：787-795)。但是，该蛋白对体内视锥细胞的保护效果的证明需要使用多次眼内注射。

从基因治疗载体大规模地表达显著水平的RdCVF是一直存在的挑战，例如参见美国专利公开第20110034546号，第[0004]段。

本文参考文献的引用或讨论不应解释为承认它们对本发明是现有技术。

发明内容

本发明部分上涉及编码RdCVF的核酸、RdCVF表达构建体、RdCVF载体、表达RdCVF的方法、减缓、预防或抑制感光细胞(例如视锥细胞和/或视杆细胞)死亡的方法、治疗诸如视网膜营养不良等眼部疾病的方法以及治疗诸如阿尔茨海默氏病和亨廷顿病、帕金森病或嗅觉疾病等神经退行性疾病。

本发明提供组合物和用于从细胞表达RdCVF蛋白的方法以及治疗方法。

本发明的一些实施方式提供核酸，所述核酸包含编码RdCVF蛋白的编码序列的核苷酸序列，其中所述RdCVF编码序列包含重编码核苷酸序列。

本发明还提供病毒载体，所述病毒载体包含核酸，其中所述核酸包含编码RdCVF蛋白的编码序列的核苷酸序列，其中所述RdCVF编码序列包含重编码核苷酸序列。

本发明的一些实施方式涉及分离的细胞，所述分离的细胞包含本发明的核酸。

本发明的其它实施方式涉及由本发明的细胞或本发明的核酸产生的RdCVF蛋白。在一些实施方式中，RdCVF蛋白不是天然存在的RdCVF氨基酸序列。

包括在本发明中的还有药物制剂，所述药物制剂包含(i)药学上可接受的载剂和(ii)本发明的核酸、本发明的病毒载体、本发明的RdCVF蛋白或其组合。

还提供用于生产RdCVF蛋白的方法，所述方法包括在允许所述RdCVF蛋白表达和分泌的条件下培养本发明的细胞，和从所述细胞的培养物中分离所述RdCVF蛋白。

本发明的一些实施方式涉及保护眼视杆细胞(ocular rod cell)的方法，所述方法包括对哺乳动物的眼睛施用本发明的核酸、本发明的病毒载体、本发明的RdCVF蛋白或它们的组合。