[发明专利]用于标记白细胞的细胞内靶标和细胞外靶标的方法

权利要求书

1.一种用于标记白细胞的细胞内靶标和细胞外靶标的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)形成以下物质的组合：

(i)细胞组合物，所述细胞组合物包含至少白细胞和血红细胞，以及

(ii)第一溶液，所述第一溶液包含能够交联所述白细胞的细胞内蛋白、脂蛋白和核酸的一种或多种试剂；

(b)将第二溶液添加到所述组合中，所述第二溶液包含能够透化所述白细胞、裂解所述血红细胞并中和所述第一溶液中的所述一种或多种试剂的交联活性的一种或多种试剂，

其中所述第二溶液包含：

(i)量为0.05％至0.5％(w/v)的洗涤剂，和

(ii)浓度为1至100mM的季铵盐或含胺的化合物，

其中所述第二溶液的pH为6.5或更低，并且

其中所述第二溶液的添加体积介于所述组合的总体积的1倍和10倍之间；

(c)在添加所述第二溶液的同时或在添加所述第二溶液之后添加特异性地结合到白细胞的细胞外靶标上的至少一种结合剂，以及特异性地结合到白细胞的细胞内靶标上的至少一种结合剂，

其中所述结合剂的每一种包括可检测试剂；以及

(d)将第三溶液添加到所述组合中，其中所述第三溶液的添加体积等于或大于所述第三溶液添加到其中的所述组合的总体积。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞组合物选自全血、骨髓和腹膜液。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中在步骤(b)之前，将在步骤(a)中获得的所述组合温育5至20分钟。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在步骤(d)之前，将在步骤(c)中获得的所述组合温育15至60分钟。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在添加所述第一溶液之后，步骤(a)的所述一种或多种试剂以0.5％至2％(v/v)的量包含在所述组合中。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中步骤(a)的一种或多种试剂选自甲醛、低聚甲醛和戊二醛。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第二溶液包含：

(i)含量适于实现将所述细胞组合物中所包含的基本上所有的血红细胞裂解，而所述细胞组合物中所包含的大多数白细胞不被裂解的洗涤剂，以及

(ii)用于中和步骤(a)的所述一种或多种试剂的中和剂。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在步骤(b)中，所述第二溶液的添加体积介于所述组合的总体积的4倍和8倍之间。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中在步骤(d)之前不执行离心步骤。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在步骤(b)之后或步骤(c)之后不执行离心步骤。

11.一种用于执行根据权利要求1至10中任一项所述的方法的试剂盒，所述试剂盒包括：

(a)第一溶液，所述第一溶液包含选自甲醛、低聚甲醛和戊二醛的化合物；

(b)第二溶液，所述第二溶液包含：

(i)季铵盐或含胺的化合物，和

(ii)洗涤剂；以及

(c)第三溶液，所述第三溶液包含：

(i)选自甲醛、低聚甲醛和戊二醛的化合物，和

(ii)洗涤剂。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其中

(a)所述第一溶液包含浓度介于5％和15％(v/v)之间的甲醛；

(b)所述第二溶液包含：

(i)浓度为1至100mM的氯化铵(NH₄Cl)，和

(ii)浓度为0.05％至0.5％(w/v)的N-月桂酰基肌氨酸钠；以及

(c)所述第三溶液包含：

(i)浓度介于0.01％和1％(v/v)之间的甲醛，和

(ii)浓度为0.01％至0.5％(w/v)的N-月桂酰基肌氨酸钠。

13.根据权利要求11或权利要求12所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包括：

(a)包含可通过流式细胞术检测的标记的至少一种结合剂，其中所述结合剂特异性地结合到白细胞的细胞外靶标上；以及

(b)包含可通过流式细胞术检测的标记的至少一种结合剂，其中所述结合剂特异性地结合到白细胞的细胞内靶标上；

其中所述细胞外结合剂和所述细胞内结合剂在单独的管中提供，或作为所述第二溶液的组分提供。