[发明专利]抗-SPLA2-V抗体以及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及新颖抗体抗-sPLA2-V以及其在诊断和治疗方法中的用途。

背景技术

分泌型磷脂酶A2(sPLA2)形成催化磷脂的sn-2脂肪酰基键的水解以释放游离脂肪酸和溶血磷脂的结构相关酶的家族。通过催化此反应，sPLA2酶在多种生物过程中起着关键作用，所述生物过程包括细胞膜的稳态、脂类消化、宿主防御、信号转导、以及脂类介质(例如类花生酸和溶血磷脂衍生物)的产生(Valentin等.2000,Bioch.Biophys.Act.59-70；Lambeau,G.,和Gelb,M.H.2008,Annu.Rev.Biochem.77,495-520)。此家族包括11个成员/异形体，称为sPLA2-IB、sPLA2-IIA、sPLA2-IIC、sPLA2-IID、sPLA2-IIE、sPLA2-IIF、sPLA2-III、sPLA2-V、sPLA2-X、sPLA2-XIIA和sPLA2-XIIB。

在蛋白水平上对特异性异形体的量化被证实存在困难因为类似的酶活性以及异形体-特异性sPLA2抗体的缺乏。

对于sPLA2-V，Munoz等开发了针对人sPLA2-V、不与其它家族成员交叉反应的单克隆抗体(Munoz等.2002J.of Immunol.Meth.262:41-51)。这些抗体获自经纯化的重组人sPLA2-V免疫的小鼠的杂交瘤并称为MCL-1B7、MCL-2A5和MCL-3G1。Munoz等描述了一种将MCL-1B7和MCL-2A5用作捕获抗体并将MCL-3G1用作检测抗体的夹心ELISA试验。此测定被描述以提供2ng/ml灵敏限。但是，此测定不在血清样品中试验。目前，单克隆抗体MCL-3G1是由Cayman Chemical以目录号Cat.N°160510出售。

Nevalainen等也开发了一种针对sPLA2-V、用于时间分辨荧光免疫测定(TR-FIA)的抗体。此多克隆抗体是通过使兔子经重组人sPLA2-V蛋白免疫获得。将TR-FIA的分析灵敏度描述为11ng/ml。在来自败血病性休克患者和健康供血者的血清样品中分析sPLA2-V含量：作者发现在两种样品中的sPLA2-V的血清浓度低于试验的分析灵敏度。

目前，需要可更精确并更灵敏地检测出生物样品(例如血清样品)中sPLA2-V的针对sPLA2-V的抗体。

发明内容

本发明的一个目的是一种针对人sPLA2-V的分离抗体，其中所述抗体具有小于5.10^-10M，优选小于2.510^-10M，优选小于1.10^-10M的结合人sPLA2-V的Kd。

在本发明的一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括以下CDR中至少一个：如下定义的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

在本发明的另一个实施方案中，所述抗体的轻链的可变区包括以下CDR中至少一个：如下定义的SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7。

在另一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括如上定义的CDR中至少一个并且轻链的可变区包括如上定义的CDR中至少一个。

在另一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括以下CDR：SEQ ID NO:8(VH-CDR1)、SEQ ID NO:10(VH-CDR2)和SEQ ID NO:12(VH-CDR3)并且轻链的可变区包括以下CDR：SEQ ID NO:5(VL-CDR1)、SEQ ID NO:6(VL-CDR2)和SEQ ID NO:14(VL-CDR3)。

在另一个实施方案中，所述抗体的重链的可变区包括以下CDR：SEQ ID NO:9(VH-CDR1)、SEQ ID NO:11(VH-CDR2)和SEQ ID NO:13(VH-CDR3)并且轻链的可变区包括以下CDR：SEQ ID NO:5(VL-CDR1)、SEQ ID NO:6(VL-CDR2)和SEQ ID NO:15(VL-CDR3)。

在另一个实施方案中，编码重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:18并且编码轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19。

本发明的另一个目的是一种表达载体，其包括SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23中至少一个。