[发明专利]用于通用实时多重分析检测的双功能寡核苷酸探针

权利要求书

1.一种用于检测至少一种靶分子的用于非诊断目的的方法，包括一种系统，所述系统包括介质探针和检测分子，所述介质探针用于检测至少一种靶分子且包括探针区域和介质区域，其特征在于，所述介质探针是寡核苷酸，所述探针区域位于所述寡核苷酸的3’-末端，并且所述介质区域位于所述寡核苷酸的5’-末端，其中在所述区域之间存在化学、生物和/或物理裂解位点，并且所述探针区域具有对于模板分子的亲和性，而所述介质区域具有另外的对于检测分子的亲和性，并且其中在所述模板分子的扩增过程期间所述介质探针在所述裂解位点裂解，并且裂解的介质区域与所述检测分子的相互作用触发可检测信号，

所述检测分子的特征在于，所述检测分子是寡核苷酸且具有至少下述区域：

a.位于所述检测分子的5’-末端的第一区域，其具有荧光受体和荧光供体中的一个，

b.第二区域，其与所述介质区域相互作用，和

c.第三区域，其具有荧光供体和荧光受体中的另一个，

所述方法包括下述步骤：

I.将所述介质探针的探针区域结合至所述模板分子和/或所述靶分子的序列；

II.借助辅助分子扩增所述模板分子和/或所述靶分子；

III.在步骤II期间利用所述辅助分子使所述介质探针在所述裂解位点裂解，其中所述辅助分子是带有5’核酸酶活性的聚合酶；以及

IV.将所述介质探针的裂解的介质区域结合至所述检测分子，其中所述介质区域的3’-末端结合至所述第二区域，

V.通过聚合酶将结合至所述检测分子的第二区域的所述介质区域进行酶促延长，其中所述聚合酶结合至结合后的介质区域的3’-末端。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使所述介质探针断裂掉诱导所述介质探针的至少一个区域的物理和/或化学性质的变化，所述物理和/或化学性质选自以下性质的组：分子量；酶活性；亲和性或亲合力；化学反应性；化学基团的存在；导电性、极性或电荷；和/或光吸收和光发射。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述介质区域结合至所述检测分子的所述第二区域。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述辅助分子选自下列分子的组：催化剂、天然物质、细胞裂解物、细胞成分和/或合成分子。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述辅助分子选自下列分子的组：蛋白质和/或核酸。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述辅助分子为酶。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述辅助分子为酶体系。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述辅助分子是来自核酸扩增系统和/或限制酶系统的分子。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述模板分子和/或所述靶分子的扩增是通过PCR来完成。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述模板分子和/或所述靶分子的扩增是通过实时PCR来完成。

11.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述检测分子由于与所述介质区域发生直接或间接的相互作用从而被修饰，所述修饰选自二级结构的变化；荧光性、磷光性、质量、吸收性、光散射、导电性、酶活性和/或亲和性的变化。

12.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，由于所述介质区域与所述检测分子的第二区域的直接或间接的相互作用，所述检测分子中发生物理或化学上可测量的变化。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，序列特异性或非序列特异性荧光探针和/或显色探针或荧光染料与所述介质探针和/或所述检测分子的至少一个区域相互作用。