[发明专利]水解探针

权利要求书

1.一种用于在样品中检测靶核酸的方法，其包括：

(a)使样品和与靶核酸第一链上第一区互补的第一靶特异性引物以及与所述第一区下游的所述靶核酸第一链上第二区互补的靶特异性探针在适于所述靶核酸与所述第一靶特异性引物以及所述靶特异性探针杂交的条件下相接触，其中所述靶特异性探针包含报道子并且与固体支持物相连接；

(b)用具有外切核酸酶活性的核酸聚合酶切割杂交的靶特异性探针以从所述固体支持物释放所述报道子；和

(c)通过检测来自所述固体支持物上所述报道子之信号的变化来检测所述靶核酸。

2.权利要求1所述的方法，其中所述第一靶特异性引物和所述靶特异性探针与所述靶核酸上的相邻序列杂交。

3.权利要求1所述的方法，其中所述第一靶特异性引物和所述靶特异性探针与所述靶核酸上的非相邻序列杂交。

4.权利要求1所述的方法，其还包括用所述具有外切核酸酶活性的核酸聚合酶延伸所述第一靶特异性引物。

5.权利要求1所述的方法，其中所述固体支持物是编码的珠。

6.权利要求1所述的方法，其中所述报道子是荧光团。

7.权利要求6所述的方法，其中所述荧光团连接在所述靶特异性探针的5’端。

8.权利要求6所述的方法，其中所述信号的变化是荧光信号的降低。

9.权利要求1所述的方法，其中所述报道子是荧光团-淬灭剂对。

10.权利要求9所述的方法，其中所述信号的变化是荧光信号的增强。

11.权利要求1所述的方法，其还包括检测来自与固体支持物相连接的非杂交探针上报道子的参考信号。

12.权利要求11所述的方法，其中所述非杂交探针连接至与所述靶特异性探针相连接的同一固体支持物上的空间上离散的位置。

13.权利要求11所述的方法，其中所述非杂交探针连接至与所述靶特异性探针相连接的固体支持物不同的固体支持物。

14.权利要求13所述的方法，其中所述不同的固体支持物是不同的编码的珠。

15.权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是第一靶核酸，所述报道子是第一报道子，所述固体支持物是第一固体支持物，并且所述方法还包括：

(a)使所述样品和与第二靶核酸第一链上第一区互补的第二靶特异性引物以及与所述第一区下游的所述第二靶核酸第一链上第二区互补的第二靶特异性探针在适于所述第二靶核酸与所述第二靶特异性引物以及所述第二靶特异性探针杂交的条件下相接触，其中所述第二靶特异性探针包含第二报道子并且与第二固体支持物相连接；

(b)用所述具有外切核酸酶活性的核酸聚合酶切割第二杂交的靶特异性探针以从所述第二固体支持物释放所述第二报道子；和

(c)通过检测来自所述第二固体支持物上所述第二报道子之信号的变化来检测所述第二靶核酸。

16.权利要求15所述的方法，其中所述第一固体支持物和所述第二固体支持物是一个固体支持物上的空间上离散的位置。

17.权利要求15所述的方法，其中所述第一固体支持物与所述第二固体支持物是物理上分离的。

18.权利要求15所述的方法，其中所述第一报道子与所述第二报道子是相同的。

19.权利要求15所述的方法，其中所述第一报道子与所述第二报道子是不同的。

20.权利要求11所述的方法，其还包括对荧光的随时间变化进行归一化。

21.权利要求1所述的方法，其还包括使所述样品和与所述靶核酸的第二链上的区域互补的第二靶特异性引物相接触。

22.权利要求21所述的方法，其还包括进行多个聚合酶链反应循环。

23.权利要求22所述的方法，其中所述多个聚合酶链反应循环在没有用于在循环之间除去自由漂浮荧光团的洗涤步骤的情况下进行。

24.权利要求22所述的方法，其中检测来自所述固体支持物上所述报道子之信号的变化包括在进行所述多个聚合酶链反应循环之前和之后检测所述信号。