[发明专利]标定试剂和方法

说明书

发明领域

本发明涉及多重测定领域，更具体地讲涉及多重测定系统、用于标定多重测定的方法和标定试剂(calibration reagent)。

发明背景

在单重测定中，分析物是在分析程序中测量的化学组分。在免疫测定中，分析物或是抗体或是抗原。抗体是在血液中的、由免疫系统产生以防护外来物的蛋白质，而所述外来物是抗原。抗体与抗原结合。

在分析前，对抗原或抗体进行标记，以便给出可测量信号。该标记可以是酶、放射性同位素或荧光素。得自免疫测定的信号可以是放射性或发光。这些信号通常称为响应。免疫测定涉及在标准化条件下进行的得自患者的临床样品与试剂(即化学溶液)之间的化学反应。结果是与样品中的分析物浓度相关的响应。在竞争性免疫测定中，分析物未经标记并与标记分子竞争。响应则是分析物浓度的减函数。在非竞争性免疫测定中，标记分子与分析物结合，响应是增函数。在这两种情况下，需要估计响应和浓度间的准确关系。这样的估计就称为标定。为了标定，需要已知浓度的样品。这些特定样品就称为标定物(calibrator)或标准品，通常提前制备。例如，可将具有已知高浓度的单个样品溶于水或动物血清中，以产生具有覆盖测量范围的一些指定较低浓度的标定物。当讨论用于标定的统计学设计时，指定的标定物浓度称为设计点。因为标定物是特别制备的，但样品不是，所以标定物和临床样品可以稍微不同的方式反应。

通常，将具有未知浓度的一组临床样品与标定物在一次测定运行中一起进行测定。将标定曲线与标定物的响应拟合。该曲线可以是直线或某些其它单调函数。通过拟合的标定曲线，将临床样品的响应转化为浓度的估计值。估计样品浓度的这一方法称为反向预测(inverse prediction)。因为响应和浓度间的关系在每次测定运行中可能变化，所以每次测定运行通常都包括标定物，这样每次测定运行就可以分别进行标定。然而，在某些系统中，假设所述关系是稳定的，使得标定不必频繁进行，例如可每月一次，或当新批次试剂启用时才进行标定(Forkman J., Doctoral Thesis, Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala, 2008, ISSN 1652-6880, ISBN 978-91-86195-13-7)。

使用单一的试剂反应混合物，在单一样品样本中检测多特异性分析物的多重测定，是本领域已知的。这些测定的一个重要组件是标定系统，其用于确定通过测定而测量的试剂(即抗体或生物标志物)的水平。经典地，使用多个任意单位来报告这些水平，这取决于测定系统所提供的定量测定程度。在定性测定中，根据所测响应信号水平，与预先指定的阳性阈值水平进行比较，报告血清样本中的靶向分子为阳性或阴性。在多种半定量测定中，同时报告了阳性/阴性结果、所测信号的量值(例如发光单位[LU], 毫伏[mVolts])、等级评分、经调整或标准化的计数(来自经修改的评分系统)或最低对照的百分率(替代评分系统)。信号量值与测试血清中存在的分子的数量在等级次序(rank order)方面相关(但并非总是与之直接成比例)。

在此我们将以本领域已知的3种不同测试类型的多重测定来举例说明：

1) 特异性IgE的分析；

2) 特异性IgG的分析；和

3) 非免疫球蛋白生物标志物(抗原)的分析。

特异性免疫球蛋白的通常的分析方法是1) 特异性IgE分析，目的是检测变态反应/超敏感性，和2) 特异性IgG分析，目的是检测例如自身免疫性疾病或感染性疾病。疾病相关抗原沉积到微阵列的限定位置。使这些抗原暴露给包含可结合到所选抗原的免疫球蛋白的患者样品。特异性免疫球蛋白用与该特异性免疫球蛋白相互作用的免疫球蛋白特异性试剂(报道分子)来检测，并且这样的相互作用可通过检测系统来分析。从而有可能检测对某抗原具有特异性的所有不同的免疫球蛋白。对于测试类型3)，非免疫球蛋白生物标志物(抗原)例如血清中的前列腺癌生物标志物的分析，具有结合到目标生物标志物的能力的分子沉积在微阵列的限定位置。沉积的分子可以是例如生物标志物-特异性抗体、酶或与目标生物标志物互补的其它分子。使沉积的分子暴露给包含可结合到所选沉积分子的生物标志物的患者样品。特异性生物标志物用与该特异性生物标志物相互作用的生物标志物特异性试剂(报道分子)来检测，并且这样的相互作用可通过检测系统来分析。