[发明专利]葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸

说明书

本发明涉及具有对蛋白酶切口的减小的敏感度的多种葡糖淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸，包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

对序列表的引用

本申请含有处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。

发明背景

发明领域

本发明涉及一种葡糖淀粉酶变体、编码该变体的多核苷酸、产生这些变体的方法、以及使用这些变体的方法。

相关技术说明

葡糖淀粉酶（1,4-α-D-葡聚糖葡糖水解酶，EC3.2.1.3）是催化D-葡萄糖从淀粉或相关寡糖和多糖分子的非还原端释放的一种酶。葡糖淀粉酶由若干丝状真菌和酵母产生，其中来自曲霉菌属（Aspergillus）的那些在商业上最为重要。

在商业上，葡糖淀粉酶用于将已经由α-淀粉酶部分水解的淀粉转化成葡萄糖。然后可以使用发酵有机体将葡萄糖直接或间接转化成发酵产品。商业发酵产品的实例包括醇类（例如，乙醇、甲醇、丁醇、1,3-丙二醇）；有机酸类（例如，柠檬酸、乙酸、衣康酸、乳酸、葡糖酸、葡糖酸盐、乳酸、丁二酸、2,5-二酮-D-葡糖酸）；酮类（例如，丙酮）；氨基酸（例如，谷氨酸）；气体（例如，H₂和CO₂）；以及更复杂的化合物，包括例如抗生素（例如，盘尼西林和四环素）；酶；维生素（例如，核黄素、B12、β-胡萝卜素）；激素以及难以合成生产的其他化合物。发酵过程通常还用于可食用酒精（例如，啤酒和酒）工业、乳制品（例如，在酸乳和奶酪的生产中）工业中。

最终产品还可以是糖浆。例如，最终产品可以是葡萄糖，但是还可以被葡萄糖异构酶转化成果糖或者由几乎均等的葡萄糖与果糖组成的一种混合物。这种混合物或者进一步富含果糖的一种混合物是全世界商业化的最常用的高果糖玉米糖浆（HFCS）。

本发明的一个目的是提供具有葡糖淀粉酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸，并且这些多肽和多核苷酸在发酵产品的生产过程中提供高产量，这些生产过程例如乙醇生产过程，包括从未糊化的生淀粉（或者未蒸煮的淀粉）的一步乙醇发酵过程。共同未决的专利申请WO2011/127802披露了来自草酸青霉菌的野生型葡糖淀粉酶。

本发明提供了与其亲本相比具有改进的特性的葡糖淀粉酶变体。

发明概述

本发明涉及一种葡糖淀粉酶变体，该葡糖淀粉酶变体至少在与SEQ IDNO:2的成熟多肽的位置79相对应的一个位置处包含一个取代，其中该变体具有葡糖淀粉酶活性。

在另外的方面,本发明涉及一种变体葡糖淀粉酶催化域，该变体葡糖淀粉酶催化域至少在与SEQ ID NO:2的成熟多肽的位置79相对应的一个位置处包含一个取代，其中该变体具有葡糖淀粉酶活性。

在另一方面，本发明涉及一种包含本发明的多肽的组合物。

本发明还涉及编码这些变体的分离的多核苷酸，包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞；以及产生这些变体的方法。

本发明还涉及在糖浆和/或一种发酵产品的生产中使用本发明的多肽的方法。

定义

葡糖淀粉酶：术语葡糖淀粉酶（1,4-α-D-葡聚糖葡糖水解酶，EC3.2.1.3）被定义为催化D-葡萄糖从淀粉或相关寡糖和多糖分子的非还原端释放的一种酶。出于本发明的目的，根据在此的‘材料与方法’部分所述的程序来确定葡糖淀粉酶活性。