[发明专利]用于固氮的筛选

权利要求书

1.一种基本上不含谷氨酰胺的培养基，包括用于检测被分析物中的谷氨酰胺的谷氨酰胺生物传感器。

2.权利要求1的培养基，其中所述谷氨酰胺生物传感器包括细菌细胞。

3.权利要求2的培养基，其中所述细菌细胞是大肠杆菌。

4.权利要求2或3的培养基，其中所述细菌细胞是谷氨酰胺营养缺陷体。

5.权利要求2-4任一项的培养基，其中与野生型细菌细胞相比，所述细菌细胞中的谷氨酰胺合成酶被下调。

6.权利要求2-5任一项的培养基，其中所述细菌细胞包括在存在谷氨酰胺的条件下表达的报道基因。

7.权利要求6的培养基，其中所述报道基因是lux。

8.权利要求1-7任一项的培养基，其中所述谷氨酰胺生物传感器是大肠杆菌菌株GlnLux。

9.权利要求1-8任一项的培养基，其中所述生长培养基是Lysogeny Broth (LB)、M9培养基、琼脂或其组合。

10.权利要求1-9任一项的培养基，进一步包括酪蛋白氨基酸。

11.权利要求10的培养基，其中所述酪蛋白氨基酸以大约0.5％v/v的量存在。

12.权利要求1-11任一项的培养基，进一步包括蛋白酶抑制剂。

13.权利要求12的培养基，包括蛋白酶抑制剂混合物。

14.权利要求13的培养基，其中所述蛋白酶抑制剂混合物以大约1％v/v的量存在。

15.权利要求1-14任一项的培养基，其中所述培养基是液体、固体或半固体。

16.权利要求1-15任一项的培养基，其中所述谷氨酰胺生物传感器被稀释最多大约1000倍。

17.权利要求1-16任一项的培养基用于培养、筛选、检测或选择固氮微生物或接种固氮微生物的应用。

18.权利要求1-16任一项的培养基用于鉴别、筛选、检测或定量测定被分析物中谷氨酰胺含量的应用。

19.权利要求18的应用，其中所述被分析物是植物、植物器官、种子、土壤或其提取物。

20.权利要求19的应用，其中所述植物、植物器官或种子是豆科植物或谷类或所述提取物来自于豆科植物或谷类。

21.权利要求20的应用，其中所述谷类是玉米。

22.权利要求20的应用，其中所述植物、植物器官或种子是绿肥或所述提取物来自于绿肥。

23.权利要求18-21任一项的应用，其中所述被分析物是微生物或其提取物。

24.权利要求23的应用，其中所述微生物是细菌或真菌或所述提取物来自于细菌或真菌。

25.权利要求24的应用，其中所述细菌是根瘤菌。

26.权利要求23的应用，其中所述微生物是内生菌。

27.权利要求26的应用，其中所述内生菌是玉米内生菌。

28.一种鉴别、筛选、检测或选择固氮微生物或接种固氮微生物的方法，所述方法包括步骤1)在权利要求1-16任一项的培养基中培养所述微生物；和2)观察和/或测量来自于所述谷氨酰胺生物传感器的信号，以鉴别、筛选、检测或选择所述微生物。

29.权利要求28的方法，用于在高通量检测中选择固氮微生物或接种固氮微生物。

30.一种鉴别、筛选或检测植物、植物器官、种子、土壤或其提取物中的固氮的方法，所述方法包括步骤1)将所述植物、植物器官、种子、土壤或其提取物的至少一部分置于权利要求1-16任一项的培养基之上或之中；和2)观察和／或测量来自于所述谷氨酰胺生物传感器的信号作为固氮的指示。

31.权利要求30的方法，用于检测植物、植物器官、种子、土壤或其提取物中的固氮，以确定不同环境条件和／或植物基因型对于所述植物、植物器官、种子、土壤或其提取物中的固氮的效果。