[发明专利]抗-α突触核蛋白结合分子

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发明背景

本发明整体涉及新的α-突触核蛋白(synuclein)特异性结合分子，特别是分别识别α-突触核蛋白和α-突触核蛋白的聚集形式的人类抗体及其片段、衍生物和变体。此外，本发明涉及包含此类结合分子、抗体及其模拟物的药物组合物和诊断组合物，作为鉴定血浆和CSF中α-突触核蛋白的毒性物类的诊断工具以及在用于治疗α-突触核蛋白聚集物相关疾患的被动接种策略中都是有价值的，所述α-突触核蛋白聚集物相关疾患例如帕金森病(PD)、路易体痴呆(DLB)和阿尔茨海默病(AD)的路易体变体和其它突触核蛋白病(synucleinopathic disease)。

蛋白质错折叠和聚集是许多神经变性疾病的病理方面。α-突触核蛋白的聚集物是路易体和帕金森病(PD)相关的路易突起的主要组分。天然未折叠的蛋白、α-突触核蛋白可采取不同的聚集形态，包括寡聚体、初原纤维和原纤维。已经显示小寡聚体聚合物是特别有毒的。

已经在健康人中检测到天然存在的抗α-突触核蛋白自身抗体，并且在患者中改变的水平与特定神经退行性疾患相关；参见综述Neff等，Autoimmun.Rev.7(2008)，501-507。因此，罹患帕金森病的患者中天然存在的抗体，自发地或在接种后，特别是在健康患者中，可以对α-突触核蛋白聚集起防护作用；参见例如Woulfe等，Neurology58(2002)，1435-1436和Papachroni等，J.Neurochem.101(2007)，749-756。迄今，自身抗体的治疗意义难以评估。这主要是由于缺乏其分离和随后体外鉴定的直接的实验方法。

最近，已经在血浆和CSF中细胞外报道了α-突触核蛋的寡聚体物类(El-Agnaf等，FASEB J.20(2006)，419-425)，并且PD小鼠模型中免疫研究显示，抗α-突触核蛋白的细胞外小鼠单克隆抗体可以减少细胞内α-突触核蛋白聚集物的累积(Masliah等，Neuron，46(2005)，857-868)，支持了如下想法：中和神经毒性聚集物而不干扰单聚合体α-突触核蛋白的有益功能的抗体可能是有用的治疗剂。然而，鉴于其非人来源，基于鼠的抗体在人中的治疗效用受制于人抗小鼠抗体(HAMA)应答。

Emadi等在J.Mol.Biol.368(2007)，1132-1144中描述了从基于抗α-突触核蛋白的人序列的噬菌体展示抗体文库分离单链抗体片段(scFv)，其仅结合α-突触核蛋白的寡聚体形式并且在体外抑制α-突触核蛋白的聚集和毒性。然而，尽管通过噬菌体展示产生scFv是非常简单的，但是该技术具有严重的缺点，因为如此产生的抗体具有针对自身抗原不希望的交叉反应性风险，并且缺乏由人免疫系统产生的进化优化的天然人抗体的特征。而且，由于在正常生理环境和功能上下文中与其它蛋白和/或与靶蛋白的交叉反应性，此类抗体可能不够特异性。例如，在帕金森病的情况下，也与α-突触核蛋白的生理衍生物交叉反应的抗体具有引起与生理靶结构的正常功能相关的副作用。在这方面，不希望的自身免疫疾病将被彻底诱导-也是在采用还以变体形式生理出现的蛋白结构的活性免疫实验的概念设计中难以计算的风险。

最近，Seitz等(81.Kongress der Deutschen Gesellschaft für Neurologie mit Fortbildungsakademie Hamburg.10.-13.09.2008)报道了通过亲和色谱从不同免疫球蛋白溶液和单一血液供体样品分离抗α-突触核蛋白多克隆自身抗体。然而，除了该方法提供仅有限量的希望抗体的事实以外，多克隆抗体具有仅有限的治疗应用用途，例如因为它们的异质性和被具有不希望的副作用的其它α-突触核蛋白结合分子污染的风险。同样，因为抗体组合物的变异性将影响总体特异性和反应性，多克隆抗体的诊断价值降低。对于抗蛋白抗体而言，更真实的情况是由于错折叠的聚集和沉积。

因此，需要克服上述限制并提供抗α-突触核蛋白的治疗性和诊断性人抗体。

发明概述