[发明专利]免疫原性组合物

说明书

技术领域

本发明涉及来自艰难梭菌(Clostridium difficile)的抗原。具体而言，本发明涉及包含来自艰难梭菌的毒素A和毒素B的片段的重组多肽。本发明还涉及包含这些多肽的免疫原性组合物或疫苗，以及本发明的疫苗和免疫原性组合物在预防或治疗中的用途。本发明还涉及使用本发明的组合物的免疫方法，以及本发明的组合物在药物制造中的用途。

背景

艰难梭菌是医院肠道感染的最重要原因并且是人中假膜性结肠炎的主要原因(Bartlett等人，Am. J. Clin. Nutr. 11 suppl:2521-6 (1980))。感染艰难梭菌的个体的总体相关死亡率在诊断的3个月内计算为5.99%，并且更高的死亡率与高龄相关，在超过80岁的患者中为13.5% (karas等人，Journal of Infection 561:1-9 (2010))。目前对艰难梭菌感染的治疗是施用抗生素 (甲硝唑和万古霉素) ，然而，已经存在对这些抗生素具有抗性的菌株的证据(Shah等人，Expert Rev. Anti Infect. Ther. 8(5), 555–564 (2010))。因此，存在对能够诱导针对艰难梭菌的抗体和/或保护性免疫应答的免疫原性组合物的需求。

发明简述

艰难梭菌的肠毒性主要由于毒素A和毒素B两种毒素的作用。这些都是有效的细胞毒素(Lyerly等人，Current Microbiology 21:29-32 (1990)。毒素A和毒素B的C末端结构域包含重复单位，例如毒素A的C末端由连续的重复单位构成(Dove等人，Infect. Immun 58:480-499 (1990))，由于这一原因，C末端结构域也可以称为‘重复结构域’。如Ho等(PNAS 102:18373-18378 (2005))中描述，这些重复部分可以进一步分为短重复(SRs)和长重复(LRs)。

已经确定了毒素A重复结构域的C末端的127-aa片段的结构(Ho等人，PNAS 102: 18373-18378 (2005))。该片段形成β-螺线管类折叠，主要由β链和低比例的α螺旋构成。

已经表明毒素A具体为C末端结构域的片段能够导致在仓鼠中的保护性免疫应答(Lyerly等人，Current Microbiology 21:29-32 (1990))、WO96/12802和WO00/61762。

已知设计在表达过程中能够正确折叠的融合蛋白是困难的。本发明的多肽是融合蛋白，其中，保持天然β-螺线管类结构，并且发现其能够在小鼠中提供针对毒素A和毒素B二者的免疫应答。

在本发明的第一个方面，提供包含第一片段和第二片段的多肽，其中

 (i) 所述第一片段是毒素A重复结构域片段；

 (ii) 所述第二片段是毒素B重复结构域片段；

 (iii) 所述第一片段包含在第一重复部分内的第一近端；

 (iv) 所述第二片段包含在第二重复部分内的第二近端；并且

其中所述第一片段和所述第二片段彼此邻近，并且其中所述第一重复部分和所述第二重复部分彼此具有序列相似性。

在本发明的第二个方面，提供编码本发明的多肽的多核苷酸。

在本发明的第三个方面，提供包含与诱导型启动子连接的本发明的多核苷酸的载体。

在本发明的第四个方面，提供包含本发明的载体或本发明的多核苷酸的宿主细胞。

在本发明的第五个方面，提供包含本发明的多肽和药学上可接受的赋形剂的免疫原性组合物。

在本发明的第六个方面，提供包含本发明的免疫原性组合物和药学上可接受的赋形剂的疫苗。

在本发明的第七个方面，提供本发明的免疫原性组合物或本发明的疫苗在治疗或预防艰难梭菌疾病中的用途。

在本发明的第八个方面，提供本发明的免疫原性组合物或本发明的疫苗在制备用于预防或治疗艰难梭菌疾病的药物中的用途。

在本发明的第九个方面，提供预防或治疗艰难梭菌疾病的方法，其包括向患者施用本发明的免疫原性组合物或本发明的疫苗。

附图简述

图1－本发明的多肽的序列表。

图2－ToxA和ToxB的C末端结构域的图示，SR重复表示为白色方框并且LR盒表示为黑色方框。

图3－融合体1中使用ToxA的第三个SR VIII和Tox B的第四个SR II之间的连接的图示。