[发明专利]鞘磷脂的测定方法和测定用试剂盒

权利要求书

1.一种样本中的鞘磷脂的测定方法，其特征在于，使样本与不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、以及胆碱氧化酶反应，并消去生成的过氧化氢，接着，使样本与不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D、以及胆碱氧化酶反应，并测定生成的过氧化氢。

2.一种样本中的鞘磷脂的测定方法，其特征在于，使样本与不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、氧化型辅酶、胆碱脱氢酶以及还原型辅酶氧化酶反应，并消去生成的过氧化氢，接着，使样本与不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D、氧化型辅酶、胆碱脱氢酶以及还原型辅酶氧化酶反应，并测定生成的过氧化氢。

3.如权利要求1所述的方法，其中，在过氧化氢酶存在下进行样本与不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、以及胆碱氧化酶的反应，在过氧化氢酶抑制剂存在下进行样本与不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D、以及胆碱氧化酶的反应。

4.如权利要求2所述的方法，其中，在过氧化氢酶存在下进行样本与不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、氧化型辅酶、胆碱脱氢酶以及还原型辅酶氧化酶的反应，在过氧化氢酶抑制剂存在下进行样本与不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D、氧化型辅酶、胆碱脱氢酶以及还原型辅酶氧化酶的反应。

5.如权利要求3或4所述的方法，其中，过氧化氢酶抑制剂为叠氮化物。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中，在过氧化物酶和一对氧化偶合发色型色原体中的一个存在下进行过氧化氢的消去，在过氧化物酶和一对氧化偶合发色型色原体存在下进行过氧化氢的测定。

7.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，在过氧化物酶和无色型色原体存在下进行过氧化氢的测定。

8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D为来源于链霉菌(Streptomyces sp.)的磷脂酶D。

9.如权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D为来源于色褐链霉菌(Streptomyces chromofuscus)的磷脂酶D。

10.一种样本中的鞘磷脂测定用试剂盒，其特征在于，包含：含有不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、胆碱氧化酶和过氧化氢酶的第一试剂；以及含有不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D和过氧化氢酶抑制剂的第二试剂。

11.一种样本中的鞘磷脂测定用试剂盒，其特征在于，包含：含有不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶和一对氧化偶合发色型色原体中的一个的第一试剂；以及含有不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D和氧化偶合发色型色原体中的另一个的第二试剂。

12.一种样本中的鞘磷脂测定用试剂盒，其特征在于，包含：含有不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、胆碱脱氢酶、氧化型辅酶、还原型辅酶氧化酶和过氧化氢酶的第一试剂；以及含有不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D和过氧化氢酶抑制剂的第二试剂。

13.一种样本中的鞘磷脂测定用试剂盒，其特征在于，包含：含有不与鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱反应而与磷脂酰胆碱反应的磷脂酶D、溶血磷脂酶或单甘油脂肪酶、胆碱脱氢酶、氧化型辅酶、还原型辅酶氧化酶、过氧化物酶和一对氧化偶合发色型色原体中的一个的第一试剂；以及含有不与甘油-3-磷酸胆碱和游离脂肪酸反应而与鞘磷脂反应的磷脂酶D和氧化偶合发色型色原体中的另一个的第二试剂。

14.如权利要求10或12所述的试剂盒，其中，过氧化氢酶抑制剂为叠氮化物。