[发明专利]核酸扩增

权利要求书

1.一种试剂盒，其中的试剂可组合形成用于核酸等温扩增的混合物，所述试剂盒包括：镁盐、季铵盐和碱金属碱。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中将所述混合物的缓冲容量设置为小于用扩增时释放的质子的期望浓度除以pH变化阈值得到的值，所述pH变化阀值是通过暴露于所述混合物的传感器检测的。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中将所述混合物的缓冲容量设置为小于用扩增时释放的质子的期望浓度除以pH变化阈值得到的值的一半，所述pH变化阀值是通过暴露于所述混合物的传感器检测的。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其中待检测的所述pH变化阈值为所述传感器的检测限。

5.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中在所述扩增的操作条件下，所述混合物的缓冲容量小于10mM，优选地小于5mM，更优选地小于1mM。

6.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中所述混合物中的缓冲剂的浓度小于5mM，更优选地小于3mM、小于2mM、或小于1mM。

7.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中如果存在硫酸盐化合物，其浓度小于15mM，优选地小于10mM、小于8mM、小于5mM、或小于1mM。

8.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中所述季铵盐的浓度介于2mM和15mM之间，所述季铵盐优选为氯化铵。

9.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中所述碱金属碱的浓度使得所述混合物的pH介于6和9之间，优选地介于7和8.8之间，更优选地介于8和8.6之间。

10.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中所述碱金属碱为NaOH、KOH或LiOH中的一种。

11.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，还包括一种或多种用于所述核酸扩增的引物，所述引物为等位基因特异性的，从而使得扩增能够指示目标核酸的存在。

12.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中所述等温扩增为链置换扩增，优选为环介导等温扩增（LAMP）。

13.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，其中所述混合物的缓冲容量基本上能够屏蔽非扩增时所释放的质子的预期量。

14.根据前述权利要求中任意一项所述的试剂盒，还包括链置换酶、核苷酸和引物，其中优选地，这些试剂中的至少一种与其余试剂分开存放。

15.一种监测核酸扩增的方法，包括以下步骤：

将核酸和根据权利要求1至14中任意一项所述的试剂盒的扩增混合物提供至pH传感器或pH指示剂；

使用等温扩增对所述核酸进行扩增；以及

使用所述pH传感器或pH指示剂检测由于扩增引起的pH的变化。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述pH指示剂为比色染料或荧光染料。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述pH传感器为离子敏感场效应晶体管（ISFET）。

18.根据权利要求15至17中任意一项所述的方法，还包括：

确定使混合物的pH变化大于预定的变化量所需要的反应时间；以及

基于所述反应时间对所述核酸的初始浓度进行定量。

19.根据权利要求15至18中任意一项所述的方法，其中所述混合物与参比电极流体连通，所述参比电极优选为银-氯化银电极。

20.根据权利要求15至19中任意一项所述的方法，其中所述混合物包含一种或多种等位基因特异性引物，所述引物具有至少一个与所述核酸的目标单核苷酸多态性（SNP）互补的碱基，所述方法还包括根据是否进行扩增来鉴定所述核酸的所述至少一个碱基，所述扩增的进行由pH传感器或pH指示剂检测。

21.根据权利要求15至20中任意一项所述的方法，其中所述扩增改变所述混合物的质子浓度使其变化量大于所述混合物的缓冲容量的10%。

22.一种方法，包括使用权利要求1至14中任意一项所述的试剂盒对核酸进行等温扩增。