[发明专利]细胞培养方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年7月8日提交的美国临时申请序列号61/505,681的权益，其全部内容通过引用结合在此。

发明领域

本发明总体上涉及细胞培养方法。

发明背景

治疗性多肽是一种重要类别的治疗性生物技术产品，并且治疗性抗体（包括鼠类的、嵌合体的、人源化的和人类抗体以及其片段）占治疗性生物制剂产品的大部分。

概述

在一个方面中，本发明的特征是一种生产重组多肽群的方法，该方法包括：提供一种重组多肽的C端变体的目标值，提供包括编码该重组多肽的核酸的一种宿主细胞，将该宿主细胞在以下条件下培养：(i)其中该细胞表达该编码的重组多肽的C端变体群以及(ii)增加该细胞的细胞内pH，并且分离该群，其中该群包括该重组多肽的C端变体的提供的目标值。

在一些实施例中，增加该细胞的细胞内pH的条件包括在一种培养基中培养这些细胞，该培养基包括以下各项中的一个或多个：(a)大约1g/L至大约50g/L赖氨酸、精氨酸和/或组氨酸；(b)大约0.1g/L葡萄糖至大约10g/L葡萄糖；(c)大约2mM至大约10mM NH₄Cl；(d)大约10μM至大约500μM氯喹；以及(e)大约10mM至大约30mM谷氨酰胺。

在一些实施例中，相对于对照培养条件，细胞内pH增加至少大约10%、至少大约20%、至少大约30%、至少大约40%、至少大约50%、至少大约60%、至少大约70%、至少大约80%、至少大约90%、至少大约100%，或者更多。在一些实施例中，相对于对照培养条件，细胞内pH值增加至少大约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3，或更多。

在一些实施例中，该目标值是在羧基端包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平。在一些实施例中，该目标值是相对于在羧基端包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平和在羧基端不包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平的总和而言，在羧基端包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平。在一些实施例中，相对于在羧基端包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平与在羧基端不包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平的总和而言，在羧基端包括赖氨酸残基或精氨酸残基的多肽的水平大约是0.1、大约是0.2、大约是0.3、大约是0.4、大约是0.5、大约是0.6、大约是0.7、大约是0.8、大约是0.9、或者大约是1。

在一些实施例中，该重组多肽是一种包含Fc的重组多肽（例如，抗体）。在一些实施例中，该目标值是在群中包括C端赖氨酸或精氨酸的重链的水平。在一些实施例中，该目标值是在群中具有C端赖氨酸或精氨酸的重链的以下水平：至少大约1%、至少大约2%、至少大约3%、至少大约4%、至少大约5%、至少大约6%、至少大约7%、至少大约8%、至少大约9%、至少大约10%、至少大约11%、至少大约12%、至少大约13%、至少大约14%、至少大约15%、至少大约16%、至少大约17%、至少大约18%、至少大约19%、至少大约20%、至少大约25%、至少大约30%、至少大约35%、至少大约40%、至少大约45%、至少大约50%、或更多。在一些实施例中，该目标值是群中K1赖氨酸变体和/或K2赖氨酸变体的水平。在一些实施例中，该目标值是在群中K1赖氨酸变体和/或K2赖氨酸变体的以下的水平：至少大约1%、至少大约2%、至少大约3%、至少大约4%、至少大约5%、至少大约6%、至少大约7%、至少大约8%、至少大约9%、至少大约10%、至少大约11%、至少大约12%、至少大约13%、至少大约14%、至少大约15%、至少大约16%、至少大约17%、至少大约18%、至少大约19%、至少大约20%、至少大约25%、至少大约30%、至少大约35%、至少大约40%、至少大约45%、至少大约50%、或更多。

在一些实施例中，该方法进一步包括测量该群中一种或多种C端变体的水平。在一些实施例中，该群是含Fc多肽或抗体的群，并且该方法进一步包括测量该群中K0、K1、或K2赖氨酸变体中的一种或多种的水平。在一些实施例中，该方法进一步包括以印刷体或电脑可读介质（例如，以测试报告、物质安全数据表（MSDS）或检测证书或分析证书（CofA））记录K0、K1、或K2赖氨酸变体中的一种或多种的水平。