[发明专利]P0基因沉默构建体和应用

权利要求书

1.一种RNA构建体，包含具有由BMYV基因组的P0基因或由直系同源基因推导的序列的正义区段序列和反义区段序列，其中，所述正义区段序列和所述反义区段序列都包含具有与来自BMYV基因组的P0基因（SEQ.ID.NO:17）或直系同源基因具有至少85%的序列同一性的序列的核苷酸片段。

2.根据权利要求1所述的RNA构建体，其中，所述正义区段和/或反义区段序列进一步包含具有与紧邻来自所述BMYV基因组的P0基因核苷酸序列的5'-端非翻译序列（5'UTR）共有至少85%的序列同一性的序列的核苷酸片段。

3.根据前述权利要求中任一项所述的RNA构建体，其中，所述正义区段和反义区段序列包含具有与来自BMYV基因组的所述P0基因共有至少85%的序列同一性的序列的核苷酸片段。

4.根据权利要求3所述的RNA构建体，其中，所述正义区段和反义区段序列进一步包含具有与BMYV基因组的PI基因共有至少85%的序列同一性的序列的核苷酸片段。

5.根据前述权利要求中任一项所述的RNA构建体，其中，所述正义区段包含所述序列SEQ.ID.NO:1或由所述序列SEQ.ID.NO:1组成和/或所述反义区段包含所述序列SEQ.ID.NO:3或由所述序列SEQ.ID.NO:3组成。

6.根据前述权利要求中任一项所述的RNA构建体，其中，所述正义区段和反义区段序列都进一步包含与所述BNYVV基因组共有至少85%的序列同一性的核苷酸片段并且优选其中所述正义区段包含SEQ.ID.NO:5的片段并且所述反义区段包含SEQ.ID.NO:6的片段。

7.根据前述权利要求中任一项所述的构建体，其中，所述一个或多个区段和所述一个或多个片段包含大于10个的核苷酸，优选15至25个核苷酸。

8.一种可转录成根据前述权利要求1至7中任一项所述的RNA构建体的DNA构建体。

9.一种包含根据前述权利要求1至8中任一项所述的核酸构建体的核苷酸序列的载体。

10.一种由根据权利要求8所述的DNA构建体或由根据权利要求9所述的载体表达的双链自身互补RNA分子。

11.一种用于在植物或植物细胞中诱导耐受性或抗性的方法，优选对至少所述BMYV病毒和可能的另外病毒的完全抗性，所述方法包括以下步骤：制备根据前述权利要求1至9中任一项所述的核酸构建体，可操作地连接至在植物或植物细胞中有活性的一个或多个调控序列，以及用所述核酸构建体转化所述植物细胞，由此在所述植物或所述植物细胞中诱导对至少所述BMYV病毒的抗性。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，其他病毒选自由芜菁黄化病毒、南瓜蚜传黄化病毒、马铃薯卷叶病毒、甘蔗黄叶病毒、豌豆耳突花叶病毒、甜菜西部黄化病毒-USA、甜菜轻型黄化病毒、谷物黄矮病毒和BNYVV病毒组成的组，优选所述BNYVV病毒。

13.一种用于诱导对至少BMYV病毒的耐受性的方法，包括以下步骤：制备包含由BNYVV核苷酸序列推导的，优选由编码所述BNYVV的P15蛋白的基因推导的正义区段和反义区段的核酸构建体。

14.一种对至少BMYV病毒和可能的一种或多种其他病毒具有耐受性或抗性的转基因植物或转基因植物细胞，优选是完全抗性的，并且所述转基因植物或转基因植物细胞包含能够表达根据权利要求1至7中任一项所述的核苷酸序列的核酸构建体、优选包含可操作地连接至植物或植物细胞中有活性的一个或多个调控序列的根据权利要求8所述的DNA构建体、和/或包含根据权利要求9所述的载体、和/或包含根据权利要求10所述的双链自身互补RNA分子。

15.根据权利要求14所述的转基因植物或转基因植物细胞，选自由生菜、黄瓜、马铃薯、甘蔗、豌豆、大麦和糖用甜菜组成的组中，优选糖用甜菜或糖用甜菜细胞。

16.一种源自根据权利要求14或15所述的转基因植物细胞的转基因植物组织和/或可再生结构，其中所述组织选自由果实、茎、根、块茎和种子组成的组中或者其中所述可再生结构选自由伤愈组织、芽或胚组成的组中。