[发明专利]霉菌的检测方法、PCR用反应液、及霉菌检测用载体

权利要求书

1.一种霉菌的检测方法，包括使霉菌的DNA中的包含靶区域的DNA片段扩增，确认有无扩增产物的工序，其特征在于，

使用ITS区域以及β-微管蛋白基因作为所述靶区域。

2.根据权利要求1所述的霉菌的检测方法，其特征在于，在用于进行所述靶区域的扩增的PCR用反应液中，用于使β-微管蛋白基因扩增的引物组与用于使ITS区域扩增的引物组的浓度比为1：0.9～1：0.1。

3.根据权利要求1或2所述的霉菌的检测方法，其特征在于，在用于进行所述靶区域的扩增的PCR用反应液中，使用具备含有序列号1所示碱基序列的正向引物及含有序列号2所示碱基序列的反向引物的引物组，来作为用于使ITS区域扩增的引物组，并且使用具备含有序列号3所示碱基序列的正向引物及含有序列号4所示碱基序列的反向引物的引物组，来作为用于使β-微管蛋白基因扩增的引物组。

4.根据权利要求3所述的霉菌的检测方法，其特征在于，在用于进行所述靶区域的扩增的所述PCR用反应液中，使用含有序列号5所示碱基序列的引物作为用于使支孢属菌特异性地扩增的正向引物。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的霉菌的检测方法，其特征在于，所述霉菌为散囊属菌Eurotium sp.、帚状曲霉种菌Aspergillus penicillioides、唯特里库拉曲霉种菌Aspergillus vitricola、局限曲霉复合种菌Aspergillus Section Restricti、构巢曲霉复合种菌Aspergillus Section Nidulantes、烟曲霉复合种菌Aspergillus Section Fumigati、黄曲霉复合种菌Aspergillus Section Flavi、青霉属菌Penicillium sp.、黑葡萄穗霉种菌Stachybotrys chartarum、腐皮镰孢种菌Fusarium solani、支孢属菌Cladosporium sp.中的至少任一种。

6.一种PCR用反应液，其是用于进行霉菌的DNA中的靶区域的扩增的PCR用反应液，其特征在于，包含：

作为用于使ITS区域扩增的引物组的、具备含有序列号1所示碱基序列的正向引物及含有序列号2所示碱基序列的反向引物的引物组；和

作为用于使β-微管蛋白基因扩增的引物组的、具备含有序列号3所示碱基序列的正向引物及含有序列号4所示碱基序列的反向引物的引物组。

7.根据权利要求6所述的PCR用反应液，其特征在于，还包含含有序列号5所示碱基序列的引物作为用于使支孢属菌特异性地扩增的正向引物。

8.一种霉菌检测用载体，其特征在于，针对一种或两种以上霉菌中的每一种，固定了具有从ITS区域选择的碱基序列的探针以及具有从β-微管蛋白基因选择的碱基序列的探针。