[发明专利]蛋白酶及其应用

权利要求书

1.一种丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶具有丝氨酸蛋白酶活性，并包括与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少66%的一致性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶包括与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少85%的一致性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列构成。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由畸枝霉属ALKO4122的保藏菌株CBS128533或由畸枝霉属ALKO4178的保藏菌株CBS 128564得到。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶的成熟形式具有在20到35kDa之间的分子量，优选在25到33kDa之间的分子量，尤其优选在28到30kDa之间的分子量。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，在pH8.5下使用30分钟反应时间并以酪蛋白为底物，所述酶的最适温度是从30℃到80℃，优选从40℃到70℃，更加优选在50℃到80℃之间，最优选70℃。

8.根据权利要求1到7中任一项所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，在50℃的温度下使用30分钟反应时间并以酪蛋白为底物，所述酶的最适pH值是从至少pH6到pH10，优选在pH9到pH10之间，最优选pH10。

9.根据权利要求1到8中任一项所述的丝氨酸蛋白酶，其特征在于，在去垢剂存在下且温度在0到90℃之间、优选在5到60℃、特别优选在10到40℃时，所述酶能够降解和去除蛋白质污垢。

10.一种具有编码丝氨酸蛋白酶的多核苷酸序列的分离的核酸分子，其选自由如下构成的组中：

（a）一种核酸分子，其编码具有丝氨酸蛋白酶活性且包括如SEQ ID NO:18所述的氨基酸序列的多肽；

（b）一种核酸分子，其编码具有丝氨酸蛋白酶活性且与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少66%的一致性的多肽；

（c）一种核酸分子，其包括如SEQ ID NO:17所述的核苷酸序列的编码序列；

（d）一种核酸分子，其包括在DSM24410中的多核苷酸序列的编码序列；

（e）一种核酸分子，其编码序列由于遗传密码的简并性而与从（c）到（d）的任一核酸分子的编码序列不同；和

（g）一种核酸分子，其包括多核苷酸序列，后者在严格条件下与包含于编码具有丝氨酸蛋白酶活性且与如SEQ ID NO:18所述的氨基酸序列具有至少66%的一致性的氨基酸序列的多肽的DSM24426或者SEQ ID NO:17中的核酸分子杂交。

11.根据权利要求10所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括多核苷酸序列，其在严格条件下与包括在以登记号DSM24426保藏的大肠杆菌RF8758中的包括核苷酸序列SEQ ID NO:11的质粒pALK3092中的多核苷酸序列杂交，或者在严格条件下与包括在以登记号DSM24427保藏的大肠杆菌RF8759中的包括核苷酸序列SEQ ID NO:12的质粒pALK3093中的多核苷酸序列杂交。

12.一种重组表达载体，其包括根据权利要求10或11所述的可操作于连接到能在适宜宿主中指导所述丝氨酸蛋白酶的表达的调控序列上的核酸序列。

13.一种宿主细胞，其包括根据权利要求12所述的重组表达载体。

14.根据权利要求13所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主是微生物宿主。

15.根据权利要求13或14所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主是丝状真菌。

16.根据权利要求13到15中任一项所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主是木霉菌属、曲霉属、镰孢菌属、腐质霉属、金孢子菌属、链孢霉属、根霉属菌、青霉菌属、毁丝霉属和被抱霉属类属的。